Trong đó:

A_{Nle c}  là diện tích pic của norleucin trong dung dịch hiệu chuẩn;

m_aa  là khối lượng của 2,5 ml dung dịch gốc axit amin, tính bằng gam (g);

A_{aa c}  là diện tích pic của axit amin trong dung dịch hiệu chuẩn;

m_Nle  là khối lượng của 2,5 ml dung dịch gốc norleucin, tính bằng gam (g).

Tính hàm lượng axit amin trong mẫu thử, w_aa, theo phần trăm khối lượng, sử dụng Công thức (3):

(3)

Trong đó:

...

...

...

A_{Nle ts}  là diện tích pic của norleucin trong dung dịch thử;

F_{R aa}  là hệ số đáp ứng của các axit amin;

γ_aa là nồng độ của axit amin trong dung dịch gốc, giả định rằng 1 L dung dịch có khối lượng 1 000 g, tính bằng gam trên 1 000 g (g/1 000 g);

m_{Nle ts}  là khối lượng của 2,5 ml dung dịch gốc norleucin trong dung dịch thử; tính bằng gam (g);

m_ex  là tổng khối lượng của dịch chiết, tính bằng gam (g);

m_ali  là khối lượng dịch chiết được sử dụng, tính bằng gam (g);

m_lp  là khối lượng của phần mẫu thử, tính bằng gam (g).

6.3  Tính kết quả khi sử dụng dung dịch pha loãng theo thể tích

Tính hệ số đáp ứng (F_{R aa}) đối với từng amino axit, sử dụng Công thức (4):

...

...

...

Trong đó

A_{Nle c}  là diện tích pic của norleucin trong dung dịch hiệu chuẩn;

A_{aa c}  là diện tích pic của axit amin trong dung dịch hiệu chuẩn.

Tính hàm lượng axit amin trong mẫu thử, w_aa, theo phần trăm khối lượng, sử dụng Công thức (5):

(5)

Trong đó:

A_{aa ts}  là diện tích pic của amino axit trong dung dịch thử;

A_{Nle ts}  là diện tích pic của norleucin trong dung dịch thử;

...

...

...

γ_aa  là nồng độ axit amin trong dung dịch gốc, tính bằng gam trên lít (g/l);

m_tp là khối lượng của phần mẫu thử, tính bằng gam (g).

CHÚ THÍCH: Các kết quả của việc tính toán được biểu thị trên sản phẩm "thực tế". Để tính độ tinh khiết theo quy định, nghĩa là hàm lượng axit amin trong sản phẩm khô, thì tính theo chất khô của sản phẩm. Độ tinh khiết thu được trực tiếp, nếu sản phẩm được làm khô trước khi phân tích.

Kết quả đối với lysine.HCl có thể được chuyển đổi thành lysine theo công thức sau:

Trong đó:

w_Lys  là phần khối lượng của lysin;

w_Lys.HCl  là phần khối lượng của lysin.HCl.

7  Độ chụm

...

...

...

Chi tiết các phép thử liên phòng thử nghiệm về độ chụm của phương pháp được nêu trong Phụ lục A.

7.2  Độ lặp lại

Thực hiện lặp lại hai lần các phép phân tích.

Tính độ chệch tương đối, biểu thị bằng phần trăm

Trong đó:

w_aa1  là giá trị thứ nhất;

w_aa2  là giá trị thứ hai;

|w_aa1 - w_aa2|  là chênh lệch tuyệt đối giữa hai giá trị.

...

...

...

Nếu giá trị D lớn hơn thì thực hiện phép phân tích trên dịch chiết thứ ba và báo cáo giá trị trung bình của ba lần xác định.

Nếu hệ số biến thiên (CV) nhỏ hơn hoặc bằng 3 % thì ghi lại giá trị trung bình của ba lần xác định.

Nếu hệ số biến thiên (CV) lớn hơn 3 % thì lặp lại phép phân tích các dung dịch thử sau khi đồng hóa.

Nếu kết quả thu được của hai dịch chiết mới không được xác nhận (D > 1,5 %) thì lỗi này là do máy sắc ký. Kiểm tra máy phân tích và lặp lại tất cả các phép đo bị ảnh hưởng.

7.3  Độ tái lập

Chênh lệch tuyệt đối giữa hai kết quả thử nghiệm (trung bình của hai lần xác định) thu được, sử dụng cùng một phương pháp, trên vật liệu thử giống hệt nhau, trong các phòng thử nghiệm khác nhau, do người thực hiện khác nhau, sử dụng thiết bị khác nhau, 95 % trường hợp nhỏ hơn giới hạn tái lập R nêu trong Phụ lục A.

8  Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm phải có ít nhất các thông tin sau:

a) mọi thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ về mẫu thử;

...

...

...

c) phương pháp thử đã dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này;

d) mọi thao tác không quy định trong tiêu chuẩn này hoặc được xem là tùy chọn, cùng với mọi tình huống bất thường có thể ảnh hưởng đến kết quả thử nghiệm;

e) kết quả thử nghiệm thu được;

f) nếu tính kiểm tra độ lặp lại thì nêu kết quả cuối cùng.

Phụ lục A

(tham khảo)

Dữ liệu thu được từ nghiên cứu cộng tác

Nghiên cứu cộng tác xác định hàm lượng lysin, methionin và threonin trong các chế phẩm hoặc premix có axit amin đậm đặc thương mại, gồm có 17 phòng thử nghiệm tham gia. Phân tích lặp lại hai lần 13 mẫu, bốn mẫu axit amin tinh khiết và sáu mẫu premix bao gồm 3 cặp trùng khớp Youden.

...

...

...

Bảng A.1 - Các kết quả thu được từ nghiên cứu cộng tác

Chế phẩm hoặc premix

Axit amin^a

Giá trị dự kiến %

Số lượng phòng thử nghiệm

Giá trị trung bình %

Độ lệch chuẩn lặp lại s_r

Hệ số biến thiên lặp lại, C_{v, r} %

Độ lệch chuẩn tái lập, S_R

...

...

...

Giới hạn lặp lại r= 2,8 s_r

Giới hạn tái lập R = 2,8 S_R

Giá trị horrat

Số 1 Bioly

Lys

17

45,89

0,39

...

...

...

1,06

2,31

1,08

2,96

1,03

Số 2 premix

Met

27,00

16

...

...

...

0,41

1,56

0,49

1,85

1,16

1,37

0,76

Thr

15,00

...

...

...

14,85

0,19

1,29

0,35

2,33

0,54

0,97

0,88

Số 3 premix

...

...

...

20,80

17

20,56

0,27

1,33

0,51

2,49

0,77

1,44

...

...

...

Met

11,00

17

11,26

0,14

1,24

0,21

1,84

0,39

...

...

...

0,66

Thr

8,00

17

8,22

0,05

0,65

0,16

1,9

...

...

...

0,44

0,65

Số 4 premix

Lys

16,80

17

16,63

0,22

1,29

...

...

...

2,32

0,6

1,08

0,89

Met

14,00

17

14,21

0,13

...

...

...

0,27

1,92

0,37

0,76

0,72

Thr

11,00

17

11,19

...

...

...

0,82

0,25

2,22

0,26

0,7

0,8

Số 5 premix

Lys

12,80

...

...

...

12,58

0,09

0,74

0,23

1,86

0,26

0,65

0,68

Met

...

...

...

17

32,04

0,16

0,5

0,83

2,59

0,45

2,32

1,09

...

...

...

22,00

17

22,1

0,18

0,81

0,43

1,94

0,5

1,2

...

...

...

Số 6 premix

Lys

12,29

17

12,3

0,21

1,68

0,26

2,13

...

...

...

0,73

0,78

Met

30,72

17

30,59

0,32

1,06

0,76

...

...

...

0,9

2,14

1,05

Thr

21,12

17

21,25

0,25

1,18

...

...

...

1,87

0,7

1,11

0,74

Số 7 premix

Lys

10,40

17

10,27

...

...

...

1,21

0,19

1,81

0,35

0,52

0,64

Met

9,00

17

...

...

...

0,08

0,92

0,13

1,48

0,23

0,38

0,52

Thr

14,00

...

...

...

14,03

0,1

0,7

0,29

2,07

0,27

0,81

0,77

Số 8 premix

...

...

...

10,24

17

10,12

0,12

1,21

0,15

1,5

0,34

0,42

...

...

...

Met

8,86

17

8,91

0,08

1,17

0,17

1,89

0,29

...

...

...

0,66

Thr

13,79

17

13,83

0,19

1,35

0,31

2,25

...

...

...

0,87

0,84

Số 9 premix

Lys

24,00

17

23,48

0,26

1,13

...

...

...

2,15

0,74

1,41

0,86

Met

19,00

17

19,09

0,19

...

...

...

0,33

1,73

0,53

0,93

0,67

Thr

15,00

17

15,09

...

...

...

1

0,3

1,99

0,42

0,84

0,75

Số 10 premix

Lys

23,28

...

...

...

22,85

0,19

0,84

0,41

1,78

0,54

1,14

0,71

Met

...

...

...

17

18,65

0,13

0,68

0,29

1,53

0,36

0,8

0,59

...

...

...

14,55

17

14,56

0,14

0,96

0,31

2,15

0,4

0,88

...

...

...

Số 11 L- Lysin.HCl

Lys

76,04

17

74,11

0,69

0,93

1,32

1,78

...

...

...

3,7

0,85

Số 12 DL- methionin

Met

93,55

17

93,27

0,79

0,85

...

...

...

1,52

2,22

3,98

0,75

Số 13 L-threonin

Thr

95,95

17

95,46

...

...

...

1,17

2,07

2,16

3,12

5,78

1,07

* Lys = lysin; Met = methionin, Thr = threonin

Thư mục tài liệu tham khảo

...

...

...

[2] J. Fontaine, M. Eudaimon, Liquid chromatographic determination of lysine, methionine, and threonine in pure amino acids (feed grade) and premixes: Collaborative study. J. AOAC Int. 2000, 83 pp. 771-783

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12430:2018 (ISO 17180:2013) về Thức ăn chăn nuôi - Xác định hàm lượng lysin, methionin và threonin trong premix và các chế phẩm axit thương mại