3.3. Kí hiệu

INS (mã số quốc tế về phụ gia thực phẩm): 160e

C.A.S (mã số hóa chất): 1107-26-2

3.4. Công thức hóa học: C₃₀H₄₀O

3.5. Công thức cấu tạo (xem hình 1)

Hình 1 - Công thức cấu tạo của all-trans-b-apo-8'-carotenal (hợp chất chính)

3.6. Khối lượng phân tử: 416,65.

4. Các yêu cầu

...

...

...

Tinh thể có ánh kim hoặc bột tinh thể, màu tím đậm, nhạy với oxy và ánh sáng.

CHÚ THÍCH: Bảo quản chế phẩm trong bao bì tránh ánh sáng và môi trường khí trơ.

4.2. Độ hòa tan

Không tan trong nước, tan rất ít trong etanol, ít tan trong dầu thực vật.

4.3. Phép thử carotenoid

Đạt yêu cầu của phép thử quy định trong 5.2.

4.4. Phép đo quang phổ

Đạt yêu cầu của phép thử quy định trong 5.3.

4.5. Các chỉ tiêu lí - hóa

...

...

...

Bảng 1 - Chỉ tiêu lí - hóa của b-apo-8'-carotenal

Tên chỉ tiêu

Mức yêu cầu

1. Hàm lượng chất màu tổng số, % khối lượng, không nhỏ hơn

96

2. Hàm lượng chất màu phụ tính theo các carotenoid ngoại trừ b-apo-8'-carotenal, % khối lượng so với chất màu tổng số, không lớn hơn

3

3. Hàm lượng tro sulfat, % khối lượng, không lớn hơn

0,1

...

...

...

2

5. Phương pháp thử

5.1. Xác định độ hòa tan, theo 3.7 trong TCVN 6469:2010.

5.2. Phép thử carotenoid

Thêm lần lượt dung dịch natri nitrit 5% và dung dịch axit sulfuric 0,5 M vào dung dịch mẫu thử trong axeton, dung dịch mẫu thử bị mất màu.

5.3. Phương pháp nhận biết bằng đo quang phổ

Xác định độ hấp thụ (A) của dung dịch mẫu thử đã pha loãng (xem 5.4) tại các bước sóng 461 nm và 488 nm. Tỷ số A₄₈₈/A_461­ phải nằm trong khoảng từ 0,80 đến 0,84.

5.4. Xác định hàm lượng chất màu tổng số, theo 3.3.1.4 (Phương pháp đo quang phổ) trong TCVN 6470:2010.

5.4.1. Điều kiện xác định bằng quang phổ

...

...

...

0,08 g ± 0,01 g;

- Dung tích các bình định mức:

V₁ = V₂ = V₃ = 100 ml;

- Dung tích các pipet:

v₁ = v₂ = 5 ml;

- Độ hấp thụ riêng của chất chuẩn:

= 2640;

- Bước sóng tương ứng với độ hấp thụ cực đại:

khoảng 461 nm.

...

...

...

Hàm lượng chất màu tổng số của mẫu thử, X₁, được tính bằng phần trăm khối lượng (%) theo công thức sau:

trong đó

A

là độ hấp thụ của dung dịch mẫu thử được pha loãng hai lần tại bước sóng 461 nm;

là độ hấp thụ riêng của b-caroten ( = 2640);

V₁

là dung tích bình định mức, tính bằng mililít (V₁ = 100 ml);

...

...

...

là hệ số pha loãng ();

w

là khối lượng mẫu thử, tính bằng gam (g).

5.5. Xác định hàm lượng chất màu phụ

5.5.1. Thuốc thử

Chỉ sử dụng thuốc thử tinh khiết phân tích, nước sử dụng phải là nước cất hoặc nước có chất lượng tương đương.

5.5.1.1. Hydroxytoluen đã butyl hóa (BHT).

5.5.1.2. 2-Propanol.

5.5.1.3. N-etyldiisopropyl-amin.

...

...

...

5.5.1.5. Axetonitril.

5.5.1.6. Metanol.

5.5.1.7. Etanol.

5.5.1.8. Tetrahydrofuran.

5.5.1.9. Dung môi pha động

Hòa tan 50 mg BHT (5.5.1.1) trong 20 ml 2-propanol (5.5.1.2) đựng trong bình định mức 1 000 ml. Thêm 0,2 ml N-etyldiiopropyl-amin (5.5.1.3), 25 ml dung dịch amoni axetat 0,2% (5.5.1.4), 455 ml axetonitril (5.5.1.5) và khoảng 450 ml metanol (5.5.1.6). Để cho hỗn hợp về nhiệt độ phòng và thêm metanol đến vạch.

Sử dụng dung môi pha động trong vòng 2 ngày sau khi chuẩn bị.

5.5.2. Thiết bị, dụng cụ

Sử dụng thiết bị, dụng cụ của phòng thử nghiệm thông thường và cụ thể như sau:

...

...

...

5.5.2.2. Cột sắc kí, ví dụ: cột pha đảo C18, Suplex pkb-100 (kích thước 250 mm x 4,6 mm, cỡ hạt 5 mm) hoặc loại tương đương.

5.5.2.3. Bình định mức, dung tích 100 ml và 1 000 ml.

5.5.2.4. Cân phân tích, có thể cân chính xác đến 0,1 mg.

5.5.3. Cách tiến hành

5.5.3.1. Chuẩn bị dung dịch mẫu thử

Cân 10 mg mẫu thử, chính xác đến 0,1 mg, hòa tan trong tetrahydrofuran (5.5.1.8) (đã được ổn định bằng dung dịch BHT 0,025 %). Chuyển hỗn hợp sang bình định mức 100 ml (5.5.2.3) và thêm tetrahydrofuran đến vạch.

Pha loãng dung dịch thu được với etanol (5.5.1.7) theo tỉ lệ thể tích 1 : 10.

5.5.3.2. Điều kiện sắc kí

- Bước sóng detector:

...

...

...

- Cột:

theo 5.5.2.2;

- Pha động:

dung môi 5.5.1.9;

- Rửa giải:

đẳng dòng;

- Nhiệt độ cột:

30 ⁰C;

- Tốc độ dòng:

...

...

...

- Thể tích bơm:

10 ml;

- Nhiệt độ bộ bơm lấy mẫu tự động:

khoảng 15 ⁰C;

- Thời gian chạy sắc kí:

khoảng 35 min.

5.5.3.3. Tiến hành sắc kí

Bơm dung dịch mẫu thử vào hệ thống HPLC. Thời gian lưu của all-trans-b-apo-8'-carotenal nằm trong khoảng từ 7 min đến 9 min và tương ứng với pic lớn nhất trên sắc kí đồ. Thời gian lưu tương đối của các carotenoid có hàm lượng nhỏ so với all-trans-b-apo-8'-carotenal là: all-trans-crocetindialdehit (0,54), all-trans-b-apo-12'-carotenal (0,84) và all-trans-b-caroten (2,55).

Tích phân diện tích các pic trên sắc kí đồ.

...

...

...

Hàm lượng các carotenoid ngoại trừ b-apo-8'-carotenal, X₂, biểu thị bằng phần trăm khối lượng so với chất màu tổng số, tính theo công thức sau:

trong đó:

A_t là tổng diện tích các pic trên sắc kí đồ, ngoại trừ pic của dung môi, tính theo đơn vị diện tích;

A_a là diện tích pic của b-apo-8'-carotenal trên sắc kí đồ, tính theo đơn vị diện tích.

5.6. Xác định hàm lượng tro sulfat, theo 5.3.3.1.1 trong TCVN 8900-2:2012, sử dụng 2 g mẫu thử.

5.7. Xác định hàm lượng chì, theo TCVN 8900-6:2012, TCVN 8900-7:2012 hoặc TCVN 8900-8:2012.

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 9958:2013 về Phụ gia thực phẩm – Chất tạo màu – B-apo–8’–Carotenal