X100gam=100 x số khuẩn lạc đếm x

1

x

1

khối lượng nuôi cấy

bội số pha loãng mẫu thử

PHỤ LỤC A

...

...

...

A1. Môi trường nước thịt: Theo phụ lục B TCVN 5153-90.

A2. Môi trường thạch deoxycholat:

- Pepton                                                                                                      10g

- Thạch                                                                                                   18-20g

- Natri deoxycholat                                                                                        1g

- Natri clorua                                                                                                  5g

- Kalihydro phophat (K₂HPO₄)                                                                         2g

- Lactos                                                                                                       10g

- Sắt xitrat                                                                                                     2g

...

...

...

- Nước cất                                                                                             1.000ml

A.3 Môi trường thạch macconkey

- Pepton                                                                                                      20g

- Thạch                                                                                                   18-20g

- Natri clorua                                                                                                  5g

- Lactos                                                                                                       10g

- Muối mật                                                                                                     5g

- Dung dịch cồn đỏ trung tính 0,1%                                                               5ml

- Nước cất                                                                                             1.000ml

...

...

...

A4. Môi trường nước pepton: Theo phụ lục B TCVN 5153-90.

A5. Môi trường nước pepton-glucose: Theo phụ lục B TCVN 5153-90

A6. Môi trường thạch Simmon-xitrat:

- Ammonium dihydrophotphat (NH₄H­₂PO₄)                                                       1g

- Magiê - sulphat (MgSO₄)                                                                           0,2g

- Kalihydro photphat (K₂HPO₄)                                                                        1g

- Natri xitrat (Na₃C₆H₅O₇.2H₂O)                                                                      2,3g

- Natri clorua (NaCl)                                                                                        5g

- Thạch                                                                                                   18-20g

...

...

...

- Xanh Brôm-thy-môn, dung dịch 0,5-1g

trong cồn (Bromthymol Blue)                                                                  10-20ml

Theo thứ tự lần lượt hoà tan các muối trong nước, cho thạch vào và đun sôi, chỉnh pH 6,8 rồi cho tiếp dung dịch xanh brôm-thy-môn. Lắc đều và lọc qua bông. Chia ra các ống nghiệm 10 x 100mm, mỗi ống từ 3-5ml. Hấp 121⁰C trong 20 phút. Để ống nằm nghiêng cho môi trường đông lại (môi trường có mầu xanh).

A7. Thuốc thử Indol: Theo phụ lục B TCVN 5153-90.

A8. Thuốc thử đỏ methil (Methyl red): Hoà tan 0,04g đỏ methyl trong 60ml cồn 95⁰, sau cho thêm 40ml nước cất.

A9. Thuốc thử đỏ Voges-Proskauer: Theo phụ lục B TCVN 5153-90.

PHỤ LỤC B

KỸ THUẬT ĐẾM VÀ TÍNH SỐ VI KHUẨN (KHUẨN LẠC).

...

...

...

B2. Các chọn đĩa môi trường để đếm.

B2.1. Chọn những đĩa khuẩn lạc mọc riêng biệt, số lượng từ 30-300 vi khuẩn.

B2.2. Nếu 2 đậm độ pha loãng kế tiếp nhau có cùng số đếm từ 30-300 thì lấy số đếm được ở từng đĩa nhân với bội số pha loãng, so sánh tỷ lệ giữa hai giá trị, nếu nhỏ hơn 2 thì lấy số đếm bình quân của cả 2 giá trị. Nếu lớn hơn 2 thì lấy số có giá trị thấp.

B2.3. Nếu các đậm độ pha loãng đều có số đếm trên 300 thì chọn đĩa môi trường có bột số phan loãng cao nhất.

B2.4. Nếu các đậm độ pha loãng đều có số đếm ít hơn 30 thì chọn đĩa môi trường có bội số pha loãng thấp nhất.

B2.5. Cách tính lại số lượng vi khuẩn: Căn cứ vào kết quả giám định 5 khuẩn lạc đại diện cho mỗi nhóm để tính lại số đếm (B2). Nếu cả 5 đều dương tính thì nhóm đó được tính 100% dương tính, nếu có 3 dương tính thì chỉ được tính là 60% dương tính.

B4. Cách tính số vi khuẩn trong 1 gam và trên 100cm² mẫu thử theo công thức:

X1g=số khuẩn lạc đếm được X

1

...

...

...

1

khối lượng nuôi cấy

bội số pha loãng mẫu thử

X100 cm² =100 X

Số khuẩn lạc đếm được X

1

x

1

...

...

...

bội số pha loãng mẫu thử

4.1. Số khuẩn lạc đếm được là số lượng bình quân trên 2 đĩa môi trường có cùng độ đậm pha loãng hoặc ở 2 độ pha loãng kế tiếp nhau và đã được xác minh lại (B3).

B4.2. Trước khi tính cần làm tròn số đếm: Dưới 10 thì làm tròn số hàng chục; dưới 5 thì lấy số hàng chục dưới, trên 5 thì lấy tròn số hàng chục trên, trên 100 nếu số hàng đơn vị là 5 thì lấy số tròn chia chẵn cho 20, các trường hợp khác thì lấy số tròn chia chẵn cho 10.

B4.3. Thí dụ và cách tính:

B4.3.1. Thí dụ: 1ml mẫu thử ở độ đậm pha loãng 10^-2 được cấy đều trên 2 đĩa môi trường. Đĩa 1 có 65 khuẩn lạc gồm 55 điển hình và 10 không điển hình. Đĩa 2 có 85 khuẩn lạc gồm 82 điển hình và 3 không điển hình.

B4.3.2. Cách tính:

- Tổng khuẩn lạc đếm được trên 2 đĩa: 150 gồm 137 điển hình và 13 không điển hình.

- Sau khi chọn và giám định lại 5 khuẩn lạc ở mỗi nhóm thì thấy (giả thiết) cả 5 khuẩn lạc ở nhóm điển hình đều không dương tính. Chiếm tỷ lệ 100% (5/5). Có 3 trong nhóm không điển hình dương tính chiếm tỷ lệ 60% (3/5).

- Căn cứ vào tỷ trên, số khuẩn lạc được tính lại như sau:

...

...

...

= 137 + 7,8

= 137 + 8 (số tròn)

= 145

= 140 (số làm tròn)

Số bình quân =  = 70

x 1g = 70 x  x

= 70 x 10²

= 7 x 10³

- Nếu tính số vi khuẩn trên 100cm² diện tích mẫu thử  cũng tính như trên rồi nhân với 100.

Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 5155:1990 về thịt và sản phẩm của thịt - phương pháp phát hiện và đếm số do Uỷ ban Khoa học Nhà nước ban hành