Chuẩn bị

Hấp bằng hơi để hòa tan, thêm nước đến 1 lít, và điều chỉnh pH đến 7,6 ± 0,1 bằng dung dịch natri hydroxit 1 mol/l.

Khử trùng ở 121^oC ± 1 ^oC trong nồi hấp áp lực trong 20 phút.

Bảo quản trong tủ lạnh sau khi đông đặc.

6.2.2. Dung dịch natri sunphit (Na₂SO₃)

Hòa tan 10 g natri sunphit trong 100 ml nước.

6.2.3. Dung dịch sắt (III) sunfat (FeSO₄)

Hòa tan 8 g sắt (III) sunfat tinh thể trong 100 ml nước.

6.2.4. Môi trường hoàn chỉnh.

...

...

...

Thêm 1 ml dung dịch natri sunphit và 5 giọt dung dịch sắt (III) (6.2.3) sunfat vào ống thạch ngay trước khi bắt đầu trình tự tiến hành (xem 9.3).

6.3. Thạch - Sunphit - Tryptoza

Thành phần:

Tryptoza

15 g

Soyton

5 g

Caomen

5 g

...

...

...

1 g

Amoni sắt (III) xitrat

1 g

Nước

1000 ml

Chuẩn bị:

Hấp bằng hơi để hòa tan và điều chỉnh pH đến 7,6 ± 0,1 ở 25^oC.

Phân chia vào các ống thử mỗi ống 18 ml. Khử trùng môi trường ở 121 ^oC ± 1 ^oC trong 15 phút.

Bảo quản trong tủ lạnh ở 4 ^oC đến 5 ^oC. Không sử dụng môi trường đã pha chế sau 2 tuần.

...

...

...

Thiết bị và dụng cụ bình thủy tinh của phòng thí nghiệm vi sinh thông thường, và

7.1. Bình thủy tinh (Erienmeyen Flask, bình đáy tròn hoặc bình nón) có dung tích 2 lít.

7.2. Ống thử 160 mm x 16 mm.

7.3. Pipet chia độ, có dung tích 10 ml có vạch chia 0,1 ml.

7.4. Pipet có dung tích 10 ml.

7.5. Bình dung tích 1 lít.

7.6. Bình hơi.

7.7. Nồi cách thủy.

7.8. Thiết bị lọc màng.

...

...

...

Chú thích - Chất lượng của màng lọc có thể khác nhau theo từng nhãn hiệu thậm chí theo từng lô sản xuất, do đó nên kiểm tra chất lượng trên cơ sở qui định của ISO 7704.

7.10. Tủ ấm, có thể duy trì được nhiệt độ ở 37 ± 1 ^oC.

7.11. Đĩa petri.

8. Lấy mẫu

Theo TCVN 5992 - 1995 (ISO 5667/2) Chất lượng nước - Lấy mẫu và ISO 8199 về kỹ thuật lấy mẫu.

9. Cách tiến hành

9.1. Xử lý mẫu

Theo TCVN 5993 - 1995 (ISO 5667/3). Chất lượng nước - Lấy mẫu - Hướng dẫn bảo quản và xử lý mẫu và ISO 8199.

9.2. Chọn lọc các bào tử (kỹ thuật)

...

...

...

9.3. Cấy mẫu và nuôi ấm

Tham khảo ISO 7704 về mô tả chung của kỹ thuật màng lọc.

Theo hướng dẫn của tài liệu trên, lọc một thể tích nước thích hợp. Đối với nước ống, nước suối, và nước giếng, nước khoáng, nước biển và nước bề mặt, ít nhiễm bẩn bởi clostridia thì lọc 100 ml; đối với nước bị ô nhiễm nặng hoặc nước thải thì dùng một thể tích nhỏ hơn. Thể tích nước ít hơn 10 ml thì nên trộn với 10 đến 100 ml nước hoặc dịch pha loãng đã khử trùng.

Điều chỉnh các dịch pha loãng sao cho các quả khuẩn lạc đen tách biệt ra và dễ dàng đếm được.

Sau khi lọc, tháo màng bằng kẹp đã khử trùng và đặt úp lên đáy của đĩa petri, đảm bảo sao cho không có bọt khí được tạo thành dưới màng lọc. Sau đó cẩn thận rót 18 ml môi trường nuôi cấy đã hoàn toàn hóa lỏng trước đó đã được làm nguội đến khoảng 50 ^oC qua màng lọc trong khi vẫn giữ kẹp thanh trùng. Sau khi đã tạo được lớp môi trường, ủ kỵ khí hoặc dưới điều kiện khác mà đảm bảo kỵ khí ở nhiệt độ 37 ^oC ± 1 ^oC  trong 20 ^h ± 4 ^h và 44 ^h ± 4 ^h . Nếu dùng tủ ấm hoặc bình kỵ khí thì màng lọc có thể đặt lên bề mặt của thạch với mặt đếm để hướng lên trên.

9.4. Biểu thị kết quả

Đếm tất cả các khuẩn lạc đen sau khi ủ 20 ^h ± 4 ^h và 44 ^h ± 4 ^h.

10. Tính toán kết quả

Tính toán kết quả theo ISO 8199.

...

...

...

Báo cáo kết quả cần nói rõ phương pháp đã sử dụng, kết quả biểu thị bằng số vi khuẩn kỵ khí khử sunphit (clostridia) trong một đơn vị thể tích mẫu. Thông thường việc đếm được tiến hành ở 44 ^h ± 4 ^h. Nếu điều đó không thể thực hiện được thì đếm ở 20 ^h ± 4 ^h và kết quả chỉ được coi là kết quả xấp xỉ.

Báo cáo kết quả phải nêu bất kỳ chi tiết thao tác nào mà không qui định trong tiêu chuẩn này hoặc những chi tiết bất thường có thể ảnh hưởng đến kết quả.

Báo cáo kết quả cần bao gồm các thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ về mẫu.

Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6191-2:1996 (ISO 6461/2:1986 (E)) về chất lượng nước - phát hiện và đếm số bào tử vi khuẩn kỵ khí khử sunphit (Clostridia) - Phần 2: Phương pháp màng lọc