Hòa tan các thành phần trong nước đang sôi.

Sau khi hòa tan hoàn toàn đun thêm 5 min.

Làm nguội ở 50 ^oC đến 60 ^oC.

6.3.1.2. Dung dịch TTC

2,3,5-triphenyltetrazolium clorua

1 g

Nước 100 ml

100 ml

Hòa tan chất chỉ thị trong nước bằng cách khuấy.

...

...

...

Bảo quản dung dịch khỏi tác động của ánh sáng và loại bỏ dung dịch nếu xuất hiện mầu hồng nhạt.

6.3.1.3. Môi trường hoàn chỉnh

Môi trường cơ bản (6.3.1.1)

1 000 ml

Dung dịch TTC (6.3.1.2)

10 ml

Thêm dung dịch TTC vào môi trường cơ bản đã làm nguội ở 50 ^oC đến 60 ^oC.

Nếu cần, điều chỉnh pH bằng dung dịch natri cacbonat (100 g/l) hoặc dung dịch natri hydroxit (40 g/l) hoặc axit clohydric (36,5 g/l) sao cho sau khi khử trùng pH đạt 7,2 ± 0,1 tại 25 ^oC.

Rót 20 ml môi trường vào các đĩa Petri đường kính 9 cm (hoặc lượng môi trường tương đương trong các đĩa có kích thước khác) và để yên trên một mặt phẳng nằm ngang, chỗ mát.

...

...

...

6.3.2. Thạch mật -aesculin - azid

Trypton

17,0 g

Pepton

3,0 g

Chất chiết nấm men

5,0 g

Mật bò, khô

10,0 g

...

...

...

5,0 g

Aesculin

1,0 g

Amoni-sắt (III) citrat

0,5 g

Natri azid (NaN₃)

0,15 g

Thạch

8 g đến 18 g¹⁾

...

...

...

1000 ml

Hòa tan các thành phần trong nước bằng cách đun sôi.

Điều chỉnh pH sao cho sau khi khử trùng pH đạt 7,1 ± 0,1 tại 25 ^oC.

Khử trùng trong 15 min tại 121 ^oC ± 3 ^oC.

Làm nguội ở 50 ^oC đến 60 ^oC và rót vào các đĩa Petri sao cho độ dày môi trường khoảng 3 mm đến 5 mm và để yên trên một mặt phẳng nằm ngang, chỗ mát.

Các đĩa này có thể bảo quản đến hai tuần ở 5 ^oC ± 3 ^oC.

7. Lấy mẫu

Tiến hành lấy mẫu theo TCVN 6663-1 (ISO 5667-1), TCVN 5992 (ISO 5667-2) và TCVN 6663-3 (ISO 5667-3).

8. Tiến hành

...

...

...

Chuẩn bị mẫu, lọc và ủ trên môi trường phân lập theo hướng dẫn được nêu trong ISO 8199 và TCVN 6507-1 (ISO 6887-1). Nên bắt đầu kiểm tra ngay sau khi lấy mẫu. Nếu giữ mẫu ở nhiệt độ môi trường xung quanh, thì việc kiểm tra cần phải tiến hành trong vòng 6 h kể từ khi lấy mẫu. Trong một số trường hợp ngoại lệ, có thể cho phép giữ mẫu tới 24 h trước khi kiểm tra nếu mẫu được bảo quản ở 5 ^oC ± 3 ^oC.

Nếu cần phải pha loãng mẫu, thì chuẩn bị các dung dịch pha loãng theo ISO 8199.

8.2. Lọc và nuôi cấy

Với các quy định chung của kỹ thuật lọc màng, xem ISO 8199.

Lọc một thể tích nước kiểm tra thích hợp.

Đặt màng lọc lên môi trường Slanetz và Bartley (6.3.1).

Ủ các đĩa ở 36 ^oC ± 2 ^oC trong 44 h ± 4 h.

8.3. Khẳng định và đếm

Sau khi ủ, coi tất cả các khuẩn lạc đã mọc có màu nâu đỏ hoặc màu hồng từ trung tâm hoặc toàn bộ khuẩn lạc là điển hình.

...

...

...

Ủ ở 44 ^oC ± 0,5 ^oC trong 2 h.

Đọc đĩa ngay lập tức.

Coi như tất cả các khuẩn lạc điển hình có mầu từ nâu đến đen ở môi trường bao quanh là phản ứng dương tính, và đếm chúng như là khuẩn đường ruột.

CHÚ THÍCH Sự phân bố không đều của khuẩn lạc hoặc số đếm quá cao có thể gây nhiễu cho sự phân biệt các khuẩn lạc dương tính, do sự khuếch tán màu đến các khuẩn lạc liền kề.

9. Đảm bảo chất lượng

Phòng thí nghiệm cần phải có hệ thống kiểm soát chất lượng để đảm bảo rằng nguyên vật liệu, thuốc thử và kỹ thuật là phù hợp với phép thử.

10. Biểu thị kết quả

Tính toán kết quả theo ISO 8199.

11. Báo cáo thử nghiệm

...

...

...

a) Viện dẫn tiêu chuẩn này;

b) Mọi chi tiết cần thiết để nhận dạng đầy đủ mẫu;

c) Số khuẩn lạc đã khẳng định như là khuẩn đường ruột;

d) Các hiện tượng đặc thù quan sát được trong suốt quá trình phân tích và mọi thao tác không qui định trong phương pháp này, hoặc coi như tùy chọn có thể làm thay đổi kết quả thử nghiệm.

1) ISO 5667-2 : 1991 đã bị hủy và được thay bằng ISO 5667-1 : 2006.

2) ISO 5667-1 đã có phiên bản năm 2006.

3) ISO 8199 đã có phiên bản năm 2005.

4) Tùy thuộc vào khả năng đông của thạch.

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 6189-2:2009 (ISO 7899 - 2 : 2000) về Chất lượng nước - Phát hiện và đếm khuẩn đường ruột - Phần 2: Phương pháp màng lọc