Cột phân tích:

Cột RP C18, dài 250 mm, đường kính 4,6 mm, cỡ hạt pha tĩnh 5 μm hoặc loại tương đương

Bước sóng:

270 nm

Tốc độ dòng:

1 ml/min

Thể tích bơm mẫu:

20 μl

...

...

...

25 °C

Thời gian phân tích:

20 min

7.3  Dựng đường chuẩn

Dựng đường chuẩn (tương quan giữa diện tích píc và nồng độ chất chuẩn) của một hoạt chất tại 5 điểm có nồng độ tương ứng dãy dung dịch chuẩn làm việc (4.13).

7.4  Xác định

Dùng xyranh (5.4) bơm điểm nồng độ thấp nhất trong dãy dung dịch chuẩn làm việc (4.13) cho đến khi số đo diện tích của pic chuẩn thay đổi không lớn hơn 3 %. Sau đó, bơm lần lượt dung dịch chuẩn làm việc từ nồng độ thấp đến cao (4.13) và dung dịch mẫu thử (7.1), lặp lại 2 lần (số đo diện tích của pic chuẩn thay đổi không lớn hơn 3 % so với giá trị ban đầu). Nếu nồng độ của mẫu thử nằm ngoài đường chuẩn thì điều chỉnh bằng cách pha loãng dung dịch mẫu thử bằng metanol (4.6).

8  Tính kết quả

Hàm lượng hoạt chất cytokinins trong mẫu là tổng hàm lượng các loại cytokinins được quy định trong mục 1, X, biểu thị bằng miligam trên kilogam (mg/kg), được tính theo công thức:

...

...

...

trong đó:

X_0i là nồng độ của cytokinin thứ i trong mẫu tính theo đường chuẩn, tính bằng miligam trên lít (mg/l);

V là thể tích dung môi chiết mẫu mililit (ml)

m là khối lượng mẫu thử, tính bằng gam (g)

P_i là độ tinh khiết của chất chuẩn cytokinin thứ i

Kết quả thử nghiệm thu được, lấy hai chữ số sau dấu phẩy.

9  Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ:

a) mọi thông tin cần thiết về việc nhận biết đầy đủ mẫu thử;

...

...

...

c) phương pháp thử đã sử dụng và viện dẫn tiêu chuẩn này;

d) mọi thao tác không được quy định trong tiêu chuẩn này, hoặc những điều được coi là tự chọn, và bất kỳ chi tiết nào có ảnh hưởng tới kết quả;

Phụ lục A

(Tham khảo)

Giới thiệu hoạt chất nhóm cytokinins

A.1  Giới thiệu hoạt chất cytokinin zeatin

- Công thức cấu tạo:

...

...

...

- Tên hóa học: IUPAC: (E)-2-methyl-4-(7H-purin-6-ylamino)but-2-en-1-ol

- Công thức phân tử: C₁₀H₁₃N₅O

- Khối lượng phân tử: 219,248 g/mol

- Nhiệt độ nóng chảy: 208 °C đến 210 °C

- Độ hòa tan: Tan tốt trong dung môi hữu cơ

- Dạng bên ngoài: Chất rắn, màu trắng đến vàng

A.2  Giới thiệu hoạt chất cytokinin zeatin riboside

- Công thức cấu tạo:

...

...

...

- Tên hóa học: 6-[(E)-4-Hydroxy-3-methylbut-2-enylamino]-9-β-D-ribofuranosylpurine

- Công thức phân tử: C₁₅H₂₁N₅O₅

- Khối lượng phân tử: 351,37

A.3  Giới thiệu hoạt chất cytokinin kinetin

- Công thức cấu tạo:

- Tên hoạt chất: cytokinin kinetin

- Tên hóa học: IUPAC: N⁶-furfuryladenine

- Công thức phân tử: C₁₀H₉N₅O

...

...

...

- Nhiệt độ nóng chảy: 269 °C đến 271 °C 12

A.4  Giới thiệu hoạt chất cytokinin benzylaminopurine

- Công thức cấu tạo:

- Tên hoạt chất: cytokinin benzylaminopurine

- Tên hóa học: IUPAC: N-(Phenylmethyl)-7H-purin-6-amine

- Công thức phân tử: C₁₂H₁₁N₅

- Khối lượng phân tử: 225,25

A.5  Hiệu suất thu hồi và giới hạn định lượng

...

...

...

- Giới hạn định lượng của phương pháp (LOQ):

- Zeatin: 5 mg/kg

- Zeatin riboside: 5 mg/kg

- Kinetin: 5 mg/kg

- Benzylaminopurine: 2,5 mg/kg

- Độ lặp lại của phương pháp, CV ≤ 7 %.

Phụ lục B

(Tham khảo)

...

...

...

THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1] TCVN 12017: 2017 Thuốc bảo vệ thực vật- Lấy mẫu

[2] Danh mục thuốc bảo vệ thực vật được phép sử dụng ở Việt Nam.

[3] Manual pesticides

[4] Analysis of cytokinins by immunoassay and high performance liquid chromatography of in vitro cultivated dianthus caryophyllus, bulg.J.PIant physiol., 1996, 22(3-4), 95-104

[5] New Methods of Qualitative and Quantitative Analysis of Cytokinins, Michal Karády

[6] Analytical methods for cytokinins, Petr Tarkowski, Liya Ge, Jean Wan Hong Yong, Swee Ngin Tan, Trends in Analytical Chemistry, Vol. 28, No. 3, 2009

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13262-4:2020 về Thuốc bảo vệ thực vật - Phần 4: Xác định hàm lượng hoạt chất nhóm Citokinins bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao