7.1.1.3  Đọc kết quả:

Mẫu dương tính cho đoạn gen kích thước 360 bp

7.1.2  Giám định bằng phương pháp Real-time RT-PCR

7.1.2.1  Tách chiết RNA

Tách chiết theo điều 7.2.1 của TCVN 12371-1:2019.

7.1.2.2  Nhân gen

Nhân gen sử dụng mồi đặc hiệu (Bertolini et al. (2010)):

PSTVd-F: 5’-CCT TGG AAC CGC AGT TGG T-3' (nt 339-357)

PSTVd-R: 5’-TTT CCC CGG GGA TCC C-3’ (nt 87-102)

...

...

...

Với chu trình nhiệt

45°C trong 10 phút

94 °C trong 10 phút

95 °C trong 15 giây

Lặp lại 40 chu kì

60 °C trong 1 phút

7.1.2.3  Đọc kết quả

...

...

...

7.1.3  Kết luận

Mẫu giám định được kết luận là loài Potato spindle tuber viroid khi:

- Có kết quả dương tính với phương pháp giám định bằng RT-PC

Hoặc

- Có kết quả dương tính với phương pháp giám định bằng Real-time RT-PCR

7  Báo cáo kết quả

Nội dung phiếu kết quả giám định gồm những thông tin cơ bản sau:

- Thông tin về mẫu giám định.

- Phương pháp giám định

...

...

...

- Kết quả giám định: Tên khoa học của loài

Phiếu giám định chi tiết tham khảo phụ lục B.

Phụ lục A

(Tham khảo)

Thông tin chung

A.1  Tên khoa học và vị trí phân loại

Tên tiếng Việt: Bệnh viroid củ khoai tây hình thoi

Tên khoa học: Potato spindle tuber viroid (PSTVd)

...

...

...

Potato gothic virus

Potato spindle viroid

Spindle tuber viroid

Tomato bunchy top viroid

Vị trí phân loại:

Nhóm: Viroids

Họ: Pospiviroidae

A.2  hân bố

Trong nước: Bệnh chưa có ở Việt Nam

...

...

...

A.3  Ký chủ

Brugmansia, Brugmansia suaveolens, Lycianthes rantonnetii, Persea americana (bơ), Solarium lycopersicum (cà chua), Solarium tuberosum (khoai tây), Cestrum, Cestrum nocturnum (dạ lý hương), Ipomoea batatas (khoai lang), Petunia hybrida, Physalis peruviana, Solanum, Solarium laxum, Solanum melongena (cà tím), Solanum muricatum, Solarium nigrum (tầm bóp), Streptosolen jamesonii.

A.4  Đặc điểm sinh học

PSTVd lây nhiễm tất cả các bộ phận của cây mẫn cảm. Viroid truyền qua cơ giới và côn trùng môi giới.

PSTVd truyền qua tay người và dao bị nhiễm nhựa nhiễm bệnh từ một trong hai cây Brugmansia suaveolens hoặc S. jasminoides đến khoai tây và cà chua. Nguồn bệnh từ cây S.jasminoides truyền bệnh tốt hơn cây B. suaveolens, cà chua dễ bị nhiễm bệnh hơn khoai tây. Hơn nữa, nhiệt độ liên tục 15 °C không truyền được viroid đối với khoai tây và khó đối với cà chua

PSTVd cũng có thể được truyền qua hạt giống và phấn hoa cà chua và khoai tây. Viroid có thể lan truyền sang cây khoai tây dại qua máy móc và trao đổi phấn hoa. Hạt giống là nguồn lây nhiễm viroid cho cây trồng khác, những cây trồng bằng hạt như cà chua và ớt.

PSTVd lan truyền qua rệp. Rệp Macrosiphum euphorbiae lan truyền với tỷ lệ thấp trên cà chua, nhưng rệp Myzus persicae hoặc Aulacorthum solani không truyền viroid. Nhưng rệp Myzus persicae truyền PSTVd trên những cây có nhiễm cả hai bệnh PSTVd và Potato leafroll virus (PLRV).

Phụ lục B

...

...

...

Mẫu phiếu kết quả giám định

Cơ quan giám định

.......................................

CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM
Độc lập - Tự do - Hạnh phúc
---------------

………., ngày ... tháng ... năm 20..…...

PHIẾU KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH

1. Tên hàng hóa:

...

...

...

3. Xuất xứ:

4. Phương tiện vận chuyển:                  Khối lượng:

5. Địa điểm lấy mẫu:

6. Ngày lấy mẫu:

7. Người lấy mẫu:

8. Tình trạng mẫu:

9. Ký hiệu mẫu:

10. Số mẫu lưu:

11. Người giám định:

...

...

...

13. Kết quả giám định:

Tên tiếng Việt: Bệnh viroid củ khoai tây hình thoi

Tên khoa học: Potato spindle tuber viroid (PSTVd)

Tên khác:

Potato gothic virus

Potato spindle viroid

Spindle tuber viroid

Tomato bunchy top viroid

Vị trí phân loại:

...

...

...

Họ: Pospiviroidae

TRƯỞNG PHÒNG KỸ THUẬT
(hoặc người giám định)
(ký, ghi rõ họ và tên)

THỦ TRƯỞNG ĐƠN VỊ
(ký, ghi rõ họ và tên, đóng dấu)

Thư mục tài liệu tham khảo

[1] Bradbury J. F (1986), Guide to Plant Pathogenic Bacteria, C.A.B International, United Kingdom.

[2] CABI (2017), Crop Protection Compedium.

[3] Commonwealth Mycologycal Institute, (1983), Plant Pathologist’s Pocketbook.

...

...

...

[5] TCVN 8597: 2010, Kiểm dịch thực vật - Phương pháp luận về việc lấy mẫu chuyến hàng.

[6] Viện Bảo vệ thực vật (1997), Tập 1: Phương pháp điều tra cơ bản dịch hại nông nghiệp và thiên địch của chúng, Phương pháp nghiên cứu bảo vệ thực vật, NXB Nông nghiệp.

[7] https://gd.eppo.int/taxon/PSTVD0

[8] https://www.apsnet.org/edcenter/disandpath/viral/pdlessons/Pages/PotatoSpindleTuber.asp

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12371-2-6:2020 về Quy trình giám định vi khuẩn, virus, phytoplasma gây bệnh thực vật - Phần 2-6: Yêu cầu cụ thể đối với Potato spindle tuber viroid