B.1.2  Hấp khử trùng bằng nồi hấp

Dùng phương pháp này để khử trùng môi trường nhân tạo. Các nồi hấp vô trùng tự động (autoclave) hoặc các nồi áp suất đều có thể sử dụng để hấp vô trùng. Các môi trường nhân tạo sau khi điều chế được đựng trong các bình thủy tinh có nắp. Các bình này được đặt trong các lồng, hộp của nồi hấp vô trùng và đặt vào nồi hấp. Không nên để nghiêng hay rót môi trường quá đầy tránh làm trào môi trường trong quá trình khử trùng. Không nên xếp chồng chéo hoặc quá đầy ảnh hưởng tới luồng không khí đối lưu trong nồi hấp. Hấp khử trùng thường ở nhiệt độ 121 °C trong thời gian 30 phút.

Khi vận hành nồi hấp vô trùng kiểu mới (autoclave) hay kiểu cũ đều cần sự giám sát cẩn thận và tuân thủ hướng dẫn sử dụng máy.

B.2  Điều chế môi trường nhân tạo

B.2.1  Môi trường Nutrient agar

Thành phần

Lab- Lemco Powder (4.13)

1 g

Yeast extract (4.32)

...

...

...

Peptone (4.33)

5 g

NaCl (4.25)

5g

Agar (4.34)

15g

Nước cất (4.2)

1 000 ml

Phương pháp điều chế:

...

...

...

Hấp khử trùng (xem B.1.2).

B.2.2  Môi trường King’ B

Thành phần

Peptone (4.33)

20 g

Glycerol (4.3)

10 ml

K₂HPO₄ (4.13)

1,5 g

...

...

...

1,5 g

Bacteriological agar (4.37)

15 g

Nước cất (4.2)

1 000 ml

Phương pháp điều chế:

Hòa tan các thành phần trên theo thứ tự vào nước cất chỉnh pH tới 7,2 ± 0,2

Hấp khử trùng (xem B.1.2).

CHÚ THÍCH: Hiện nay, trên thị trường có rất nhiều loại môi trường nhân tạo để nuôi vi khuẩn có thể mua các loại môi trường này sau đó điều chế theo hướng dẫn của nhà sản xuất hoặc tự điều chế theo phương pháp nêu trên.

...

...

...

Phụ lục C

(Quy định)

Dung dịch bảo quản mẫu

Có thể sử dụng một trong những dung dịch bảo quản sau:

Dung dịch 1:

CuSO₄ (4.15)

85 g

...

...

...

28,4 ml

Nước (4.2)

2 485 ml

Dung dịch 2:

H₂SO₃ (4.16)

284 ml

...

...

...

3 785 ml

Dung dịch 2:

Muối bão hòa

1 000 ml

Fomalin (4.17)

500 ml

...

...

...

870 ml

Dung dịch 3:

Fomalin (4.17)

450 ml

Cồn 70 % (4.4)

540 ml

...

...

...

1 810 ml

Cách pha dung dịch muối bão hòa:

Hòa tan muối trong nước nóng đến mức độ bão hòa.

Để dung dịch nguội trong 3 giờ.

Lọc bỏ phần không tan hết

Thư mục tài liệu tham khảo

[1] Bradbury J. F,1986. Guide to Plant Pathogenic Bacteria, C.A.B International, United Kingdom.

[2] Commonwealth Mycologycal Institute, (1983), Plant Pathologist's Pocketbook.

...

...

...

[4] Viện Bảo vệ thực vật, (1997), Tập 1: Phương pháp điều tra cơ bản dịch hại nông nghiệp và thiên địch của chúng, Phương pháp nghiên cứu bảo vệ thực vật, NXB Nông nghiệp.

[5] QCVN 01-175:2014. Lưu giữ, bảo quản và vận chuyển mẫu trong kiểm dịch thực vật

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12371-1:2019 về Quy trình giám định vi khuẩn, virus, phytoplasma gây bệnh thực vật - Phần 1: Yêu cầu chung