CHÚ THÍCH: thời gian được tính từ khi nhiệt độ lên tới nhiệt độ yêu cầu

B.1.2  Hấp khử trùng bằng nồi hấp

Dùng phương pháp này để khử trùng môi trường nhân tạo. Các nồi hấp vô trùng tự động kiểu mới (autoclave) hoặc các nồi áp suất kiểu cũ đều có thể sử dụng để hấp vô trùng. Các môi trường nhân tạo sau khi điều chế được dựng trong các bình thủy tinh có nắp. Các bình này được đặt trong các lồng, hộp của nồi hấp vô trùng và đặt vào nồi hấp. Không nên để nghiêng hay rót môi trường quá đầy tránh làm trào môi trường trong quá trình khử trùng. Không nên xếp chồng chéo hoặc quá đầy ảnh hưởng tới luồng không khí đối lưu trong nồi hấp. Hấp khử trùng thường ở nhiệt độ 121°C trong thời gian 30 phút. Khi vận hành nồi hấp vô trùng kiểu mới (autoclave) hay kiểu cũ đều cần sự giám sát cẩn thận và tuân thủ hướng dẫn sử dụng máy.

B.2  Phương pháp điều chế môi trường nhân tạo

B.2.1  Môi trường V8

Thành phần

V8 juice

50 ml

Agar

...

...

...

Nước

950 ml

Cách điều chế: Hòa tan các thành phần, đun tới khi hòa tan hoàn toàn

Bổ sung kháng sinh sau khi hấp khử trùng.

Thành phần kháng sinh

Piramicin 50 %                           10 mg

Sodium ampicillin                        250 mg

Rifamycin-SV (sodium salt)        10 mg

Terrador (75 % PCNB)                66,7 mg

...

...

...

B.2.2. Môi trường Lima bean agar (LBA)

Thành phần

Đậu Lima           200 g

Agar                   20g

Nước                 1.000 ml

Cách điều chế: cho phần đậu vào nước, đun tới khi đậu mềm. Xay hỗn hợp nước và đậu tới khi mịn. Hòa tan agar vào hỗn hợp.

B.2.3  Môi trường Carrot agar

Thành phần

Cà rốt

...

...

...

Agar

15g

Nước

1.000ml

Cách điều chế: Cho phần cà rốt vào nước đun tới mềm. Xay hỗn hợp tới min, hòa tan agar vào hỗn hợp.

B.2.4. Dịch Chiết đậu hà lan

Thành phần

Đậu hà lan

200g

...

...

...

1.000ml

Cách điều chế: Cho phần đậu hà lan vào nước đun tới mềm. Xay hỗn hợp tới min lọc qua vài lọc lấy nước trong

CHÚ THÍCH: Hiện nay, trên thị trường có rất nhiều loại môi trường nhân tạo để nuôi cấy nấm như: PDA, CMA, NA, V8 agar… có thể mua các loại môi trường này sau đó điều chế theo hướng dẫn của nhà sản xuất hoặc tự điều chế theo phương pháp trên đây.

Phụ lục C

(Quy định)

Dung dịch bảo quản mẫu và dung dịch cố định tiêu bản

C.1  Dung dịch bảo quản

Có thể sử dụng một trong những dung dịch bảo quản sau

...

...

...

CuSO4

85 g

H₂SO₃

28,4 ml

Nước

2.485 ml

Dung dịch 2

H₂SO₃

284 ml

...

...

...

3.785 ml

Dung dịch 3

Muối bão hòa

1.000 ml

Fomalin

500 ml

Nước

870 ml

Dung dịch 4

...

...

...

450 ml

Cồn

540 ml

Nước

1.810ml

Cách pha dung dịch muối bão hòa:

Hòa tan muối trong nước nóng đến mức độ bão hòa.

Để dung dịch nguội trong 3 tiếng.

Lọc bỏ phần không tan hết

...

...

...

Tùy theo độ đặc của của keo Bôm Canada mà tỉ lệ pha có thể khác nhau, thường tỉ lệ như sau:

Keo Bôm Canada             100 ml

Xylene                              100 ml đến 200 ml

C.3  Dung dịch Lactoglycerol

Axit lactic           10 ml

Glycerol             20 ml

Nước                 10ml

C.4  Dung dịch Lactophenol

Dung dịch lactophenol có thể mua dưới dạng pha chế sẵn hoặc có thể tự pha chế theo tỉ lệ sau:

...

...

...

10 ml

Glycerol

10 ml

Phenol

10 ml

Nước

10 ml

CHÚ THÍCH : Xylene, phenol là các chất độc hại, tránh tiếp xúc trực tiếp với da trần, sử dụng găng tay, khẩu trang và dụng cụ bảo hộ lao động trong thời gian tiếp xúc với các hóa chất này

...

...

...

(Quy định)

Các dịch chiết mẫu

D.1  PBS

Thành phần

NaCI

8g

KCl

0,2 g

Na₂HPO₄

...

...

...

KH₂PO₄

0,2 g

Nước

1.000 ml

Hòa tan hoàn toàn các thành phần chuẩn độ tới pH 7,2

D.2  CTAB

Thành phần

CTAB

2g

...

...

...

10 ml

EDTA 0,5M

4 ml

NaCl 5M

28 ml

PVP 40

1 g

Nước

100 ml

...

...

...

D.3  TE

Thành phần

Tris HCl 1M

1 ml

EDTA 0,5M

0,2 ml

Nước

100 ml

Hòa tan hoàn toàn các thành phần.

...

...

...

Thành phần

Tris HCl 1M

5 ml

NaCl 5M

20 ml

EDTA 0,5M

4 ml

PVP 40

1 g

...

...

...

Phụ lục E

(Tham khảo)

Mẫu phiếu kết quả giám định

Cơ quan Bảo vệ
và Kiểm dịch thực vật
…………………..................

CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM
Độc lập - Tự do - Hạnh phúc
---------------

…………., ngày … tháng … năm 20…

PHIẾU KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH

...

...

...

2. Nước xuất khẩu:

3. Xuất xứ:                              Khối lượng:

4. Phương tiện vận chuyển:

5. Địa điểm lấy mẫu:

6. Ngày lấy mẫu:

7. Người lấy mẫu:

8. Tình trạng mẫu:

9. Ký hiệu mẫu:

10. Số mẫu lưu:

...

...

...

12. Phương pháp giám định: Theo TCVN 12195-2-6:2018, Quy trình giám định nấm gây bệnh thực vật.

Phần 2-6: Yêu cầu cụ thể đối với nấm Phytophthora boehmeriae Sawada.

13. Kết quả giám định:

Tên tiếng Việt: Bệnh thối quả bông

Tên khoa học: Phytophthora boehmeriae Sawada

Vị trí phân loại

Giới: Chromista

Ngành: Oomycota

Lớp: Oomycetes

...

...

...

Họ: Peronosporaceae

Giống: Phytophthora

TRƯỞNG PHÒNG KỸ THUẬT
(hoặc người giám định)
(ký, ghi rõ họ và tên)

THỦ TRƯỞNG ĐƠN VỊ
(ký, ghi rõ họ và tên, đóng dấu)

THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1]  CABI, (2017), Crop Protection Compedium.

[2]  Commonwealth Mycologycal Institute, (1983), Plant Pathologist's Pocketbook.

...

...

...

[4]  IPPC, (2006), ISPM 27 Diagnostic protocols for regulated pests.

[5]  Shen, G., Wang, Y. C., Zhang, W. L, and Zheng, X. B, (2005), Development of a PCR assay for the molecular detection of Phytophthora boehmeriae in infected cotton, J. Phytopathol, 153:291- 296.

[6]  Viện Bảo vệ thực vật, (1997), Tập 1: Phương pháp điều tra cơ bản dịch hại nông nghiệp và thiên địch của chúng, Phương pháp nghiên cứu bảo vệ thực vật. NXB Nông nghiệp.

[7]  Viện Nấm học quốc tế IMI, (1994), Kỹ thuật chẩn đoán và giám định bệnh hại cây trồng. Lớp tập huấn 08-15/12/1994, tại Viện Bảo vệ thực vật, Hà Nội.

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12195-2-6:2018 về Quy trình giám định nấm gây bệnh thực vật - Phần 2-6: Yêu cầu cụ thể đối với Phytophthora boehmeriae Sawada