LƯU Ý:

Nếu mẫu nhiều béo, khi cho n-hexan vào và lắc quá mạnh, dung dịch sẽ tạo huyền phù khó tách lớp. Nên lắc vừa phải và tiến hành loại béo lần thứ hai (nếu cần).

7.6  Điều kiện phân tích của LC-MS/MS

7.6.1  Yêu cầu chung

Thực hiện bảo dưỡng LC và MS để đảm bảo thiết bị hoạt động tốt. Cần thực hiện chuẩn hóa các điều kiện của sắc ký lỏng như tốc độ dòng, thành phần pha động, nhiệt độ cột và các điều kiện của đầu dò MS/MS như điện thế mao quản, điện thế đầu cone, năng lượng va chạm, tốc độ khí va chạm...để mỗi chất phân tích thu được tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu (S/N) lớn hơn 3 cho các phân mảnh ion và luôn tồn tại 4 điểm nhận dạng (IP) bao gồm 1 ion mẹ, 2 ion con; không có píc nhiễu tại vị trí của píc phân tích.

7.6.2  Ví dụ về điều kiện phân tích LC-MS/MS

a) Điều kiện đối với LC:

- Nhiệt độ cột: 40 °C;

- Thể tích bơm mẫu: 10 ml;

...

...

...

Kênh A: axetonitril (3.7).

Kênh B: dung dịch 2 mM amonium format, pH = 3,0 (3.21).

Bảng 2 - Điều kiện gradient cho hệ thống UPLC

Thời gian, min

Tốc độ dòng, (ml/min)

Kênh A, %

Kênh B, %

0

0,2

...

...

...

95

0,5

0,2

5

95

1,0

0,2

20

80

...

...

...

0,2

80

20

4,2

0,2

5

95

6,0

0,2

...

...

...

95

b) Điều kiện trên MS

- Chế độ ion hóa: ion dương;

- Nhiệt độ nguồn ion hóa: 150 °C;

- Nhiệt độ hóa hơi dung môi: 400 °C;

- Tốc độ dòng khí làm bay hơi dung môi: 800 l/h;

- Tốc độ dòng khí qua cone Gas: 30 l/h;

- Chế độ MRM: theo các điều kiện như Bảng 3.

Bảng 3 - Điều kiện phân mảnh MS-MS

...

...

...

lon mẹ, m/z

Ion định lượng, m/z (năng lượng, eV)

Ion định tính, m/z (năng lượng, eV)

Năng lượng (Sample Cone) (V)

Clenbuterol

276

202 (14)

167 (28)

18

...

...

...

286

203 (16)

168 (30)

18

Salbutamol

240

222 (10)

148 (18)

16

...

...

...

243

255 (10)

151 (16)

18

Ractopamin

302

164 (16)

121 (28)

20

...

...

...

308

168 (16)

290 (22)

20

7.7  Trình tự bơm mẫu

Trình tự bơm mẫu theo thứ tự đề nghị như sau: dung dịch các chất chuẩn (bảng 1, 7.5.3); mẫu kiểm soát; nước cất không chứa các chất phân tích; mẫu trắng; mẫu thử; sau tối đa 24 mẫu phải bơm lại dung dịch các chất chuẩn (bảng 1, 7.5.3), mẫu kiểm soát và mẫu trắng; mẫu kiểm soát nên được tiêm lại sau cuối mỗi dãy mẫu. Không được có píc nhiễu của các chất phân tích trong mẫu nước cất được bơm vào thiết bị.

8  Tính kết quả

8.1  Tính hệ số tín hiệu

Tính cho từng chất cần phân tích theo phương trình:

...

...

...

Area     là diện tích píc của ion định lượng của chất phân tích;

ISConc             là nồng độ ion định lượng của chất nội chuẩn tương ứng chất phân tích;

ISArea là diện tích píc của ion định lượng của chất nội chuẩn tương ứng chất phân tích.

8.3  Hàm lượng chất phân tích trong mẫu

Dư lượng các chất cần phân tích trong mẫu thử, C, được biểu thị bằng nanogam trên gam (ng/g) và được tính theo công thức sau:

C  là nồng độ của Agonist có trong mẫu, tính bằng ng/g;

C_x  là nồng độ Agonist đo được suy ra từ đường chuẩn tương ứng với chất phân tích, ng/ml;

V₁  là thể tích dịch chiết ban đầu (5 ml), tính bằng ml;

...

...

...

V₃  là thể tích định mức cuối cùng (1ml), tính bằng ml;

F  là hệ số pha loãng mẫu khi đo (nếu không pha loãng, F = 1);

m  là khối lượng mẫu thử, tính bằng gam (g).

9  Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ:

- mọi thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ về mẫu thử;

- phương pháp lấy mẫu đã sử dụng, nếu biết;

- phương pháp thử đã dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này;

- tất cả các chi tiết thao tác không quy định trong tiêu chuẩn này, hoặc tùy chọn cùng với các chi tiết bất thường nào khác có thể ảnh hưởng đến kết quả;

...

...

...

THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1] United States Department of Agriculture Food Safety and Inspection Service, Office of Public Health Science, Screening and Confirmation of Beta-Agonists by HPLC/MS/MS, CLG- AGON1.04.

[3] AOAC Offical Method 2011.03, Parent and total Ractopamine in Bovine, Swine and Turkey tissues, LC-MS-MS.

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 11294:2016 về Thịt và sản phẩm thịt - Xác định dư lượng B2-agonist trong thịt gia súc bằng phương pháp sắc ký lỏng phổ khối lượng hai lần