2. PHƯƠNG PHÁP THỬ

2.1 Lấy mẫu

2.1.1 Lô sản phẩm là các tập hợp các sản phẩm cùng loại, được sản xuất trong cùng một điều kiện, được bảo quản cùng một nơi.

2.1.2 Đơn vị sản xuất là một chai.

2.1.3 Số đơn vị lấy mẫu phải phù hợp với bảng 2 của TCVN 1694-75 với hệ số chính xác a là 0,250.

Khối lượng lô không được quá 5 tấn. Lấy ngẫu nhiên khoảng 50ml ở mỗi chai và lượng mẫu lấy ở mỗi chai phải bằng nhau.

Trộn đều các mẫu và chia làm 2 phần, một phần đem phân tích, một phần làm mẫu lưu. Mẫu lưu được cho vào bình thuỷ tinh khô sạch, có nút đậy kín và trên bình có dãn nhãn ghi rõ:

Cơ quan lấy mẫu.

Tên sản phẩm.

...

...

...

Ngày lấy mẫu.

Số đăng ký.

Nếu mẫu thử không đạt tiêu chuẩn, cho phép lấy mẫu lần thứ hai với khối lượng gấp đôi ở chính lô hàng đó. Kết quả lần này là kết quả cuối cùng.

2.2 Tất cả các phép xác định phải tiến hành song song với ít nhất hai lượng cân mẫu thử. Sai lệch cho phép giữa hai kết quả xác định song song không được quá 2% sai số tương đối.

2.3 Thuốc thử dùng trong phép phân tích là loại tinh khiết phân tích.

2.4 Xác định hàm lượng Validamycin A.

Xác định theo TCVN 4541 - 88.

2.4.1 Nguyên tắc

Mẫu phân tích sau khi silan hoá được hoá thành hơi rồi được khí mang đưa vào cột tách trong đó các cấu tử có trong mẫu được tách riêng ra rồi lần lượt được khí mang đưa ra khỏi cột chuyển sang bộ phận phát hiện để xác định. Việc định tính và định lượng hoạt chất được xác định theo thời gian lưu và diện tích đỉnh hoạt chất trên sắc ký đồ. Diện tích này được so sánh với diện tích mẫu của mẫu chuẩn tiến hành trong cùng điều kiện phân tích.

...

...

...

Máy sắc ký khí.

Bộ phận phát hiện ion hoá ngọn lửa.

Cột tách dài 1,1m, đường kính trong 3mm bằng thuỷ tinh.

Microxilanh 10 ml.

Khí mang nitơ độ tinh khiết 99,9% thể tích.

Khí đốt hidro, độ tinh khiết 99,9% thể tích.

Khí nén không lẫn nước.

Máy sấy chân không.

Máy cô quay trong chân không.

...

...

...

Hoá chất.

Chất nhồi cột: shimalite W, cỡ hạt 0,11 - 0,13mm rửa bằng axit và xử lý với dimetyldiclosilan (shimalite W AW-DMCS) tẩm với ailicone OV 17.

Validamycin A chuẩn.

Chất chuẩn nội melezitone.

Dung dịch chuẩn nội melezitone được điều chế như sau: cân chính xác 34mg melezitone sang qua bình định mức 100ml, thêm nước cất cho đến vạch.

N,C-bis (trimetylsilyl) axetoamid (BSA).

Trimetylclosilan (TMCS).

Piridin.

Hoá chất silan hoá được điều chế như sau: trộn hỗn hợp piridin BSA và TMCS theo tỷ lệ 2:1:1.

...

...

...

2.4.3.1 Chuẩn bị dung dịch chuẩn

Cân khoảng 120mg Validamicin A chuẩn (chính xác 0,000g) và chuyển giao vào bình định mức 200ml, thêm nước cất đến vạch.

Hút 1ml dung dịch nói trên cho vào bình quả lê 25ml có nút đậy, thêm 1ml chuẩn nội rồi 3ml piridin.

Làm bốc hơi dung môi bằng máy bốc hơi quay ở nhiệt độ 40⁰C - 60⁰C dưới áp suất kém. Thêm 1ml piridin và lại làm bốc hơi ở nhiệt độ 40⁰C - 60⁰C dưới áp suất kém đến cạn khô.

Đặt bình quả lê 25ml vào tủ sấy chân không ở nhiệt độ 60⁰C dưới áp suất kém trong 1 giờ đến cạn khô.

Thêm 400 ml dung dịch silan hoá vào bình, đậy bình quả lê lại thật kín về để ở nhiệt độ 70⁰C trong 30 phút. Đó là dung dịch chuẩn.

2.4.3.2 Chuẩn bị dung dịch thử

Cân một lượng mẫu thử chứa khoảng 60mg Validacin 3% dạng dung dịch chính xác đến 0,0002g, sang qua bình định mức 100ml. Làm đầy đến vạch bằng nước cất.

Hút 1ml dung dịch nói trên cho vào bình quả lê 25ml có nút đậy, thêm 1ml dung dịch chuẩn nội và tiếp tục như phần pha chế dung dịch chuẩn ở phần a mục 2.2.2.3

...

...

...

Nhiệt độ lò

250⁰C

Nhiệt độ buồng tiêm mẫu

270⁰C

Lưu lượng khí mang

80ml/phút

Lưu lượng khí nén

500ml/phút

Lưu lượng khí đốt

...

...

...

Lượng mẫu bơm

1 ml

Bơm 1 ml dung dịch chuẩn và 1 ml dung dịch thử vào buồng mẫu. Đo chiều cao của mỗi đỉnh.

2.4.3.4 Tính kết quả

Hàm lượng Validamicin A (X) tính bằng % theo công thức:

X=

R₂.m₁.

1

. 100

...

...

...

R₁. m₂.

1

200

Trong đó:

m₁ : khối lượng Validamycin A dùng để pha chế dung dịch chuẩn, mg.

m₂ : khối lượng mẫu thử, mg.

R₁ : tỷ lệ chiều cao (hoặc diện tích) đỉnh của mẫu chuẩn trên chiều cao (hoặc diện tích) của chuẩn nội melezitose (Validamycin A/melezitose)

R₂ : tỷ lệ chiều cao (diện tích) đỉnh của mẫu thử trên chiều cao (hoặc diện tích) chuẩn nội (Va-lidamycin A/melezitose).

3.2 Xác định độ pH

...

...

...

3.3 Xác định ngoại quan

Xác định bằng mắt, sản phẩm có màu xanh lá cây, không lắng cặn là được.

4. BAO GÓI, GHI NHÃN, VẬN CHUYỂN VÀ BẢO QUẢN

Theo TCVN 3711 - 82 và 64TCN 55 - 91.

Tiêu chuẩn ngành 64TCN 57:1991 về thuốc trừ nấm bệnh validacin 3% dạng dung dịch