6.2  Quy trình xác định formaldehyt thoát ra bằng phương pháp HPLC

6.2.1  Vận chuyển và bảo quản da đối với phương pháp HPLC

Để tránh nhiễm bẩn chéo và thất thoát formaldehyt trong suốt quá trình vận chuyển và bảo quản, các mẫu da phải được để trong túi nhựa trơ kín khí được hàn kín.

CHÚ THÍCH Túi polyetylen nhiều lớp tráng kim loại bên trong là phù hợp.

6.2.2  Lấy mẫu

Lấy sáu mẫu thử kích thước (100 x 40) mm, theo TCVN 7117 (ISO 2418) và dùng dao dập (5.8) phù hợp với TCVN 7115 (ISO 2419). Sử dụng năm mẫu thử này để xác định formaldehyt thoát ra. Sử dụng mẫu thử thứ sáu để xác định chất bay hơi.

Để treo các mẫu thử từ 1 đến 5, trên mỗi mẫu đục một lỗ kích thước từ 3 mm đến 4 mm gần chính giữa và cách mép trên của mỗi mẫu 10 mm.

6.2.3  Xác định chất bay hơi

Nếu yêu cầu tính kết quả theo khối lượng khô, sử dụng mẫu thứ sáu để xác định chất bay hơi theo TCVN 10048 (ISO 4684). Không nghiền hoặc cắt mẫu thử.

...

...

...

Cân năm mẫu thử chính xác đến 0,01 g.

Dùng pipet lấy 50 ml nước khử khoáng cho vào từng chai polyetylen 1l đã được làm sạch và sấy khô. Treo mẫu vào mỗi mốc của 5 chai và đậy kín.

Dùng pipet lấy 50 ml nước khử khoáng cho vào một chai polyetylen 1l sạch. Đậy chặt chai mà không có mẫu thử. Sử dụng chai cho phép thử trắng.

Ngay khi gắn kín chai, cho vào tủ sấy gia nhiệt tại nhiệt độ (60 ± 2) °C trong (180 ± 15) min.

Lấy các chai ra khỏi tủ sấy và để nguội đến nhiệt độ phòng trong khoảng 1h. Sau đó lấy mẫu thử da ra khỏi chai và phân tích ngay formaldehyt hấp thụ trong nước theo 6.2.5.

6.2.5  Phản ứng với DNPH

Dùng pipet lấy 4,0 ml axetonitril (4.2.2), 5,0 ml nước từ chai polyetylen (5.1) và 0,5 ml dung dịch DNPH (4.2.1) vào bình định mức 10 ml (5.2). Thêm nước khử khoáng vào bình đến vạch định mức và dùng tay lắc nhanh để trộn hỗn hợp. Để yên hỗn hợp ít nhất 60 min, nhưng không quá 180 min. Sau khi lọc qua màng lọc (5.10), phân tích mẫu sử dụng HPLC. Nếu nồng độ nằm ngoài giới hạn hiệu chuẩn, lấy lượng ít hơn.

6.2.6  Điều kiện HPLC

Các điều kiện này chỉ là khuyến nghị. Phương pháp sử dụng phải được xác nhận tại bằng xác định tỉ lệ thu hồi.

...

...

...

Tốc độ dòng

1,0 ml/min

Pha động:

Axetonitril/nước, 60:40

Cột tách:

Cột pha đảo C18 có cột điều chế (1 cm, RP18)

Bước sóng phát hiện UV:

360 nm

Thể tích bơm:

...

...

...

6.2.7  Hiệu chuẩn HPLC

Dùng pipet lấy 0,5 ml dung dịch formaldehyt gốc thu được trong 6.1.1, với hàm lượng formaldehyt định sẵn chính xác, cho vào bình định mức 500 ml (5.2), có sẵn khoảng 100 ml nước. Trộn và làm đầy đến vạch định mức bằng nước, và trộn lại. Dung dịch này là dung dịch chuẩn để hiệu chuẩn, nghĩa là dung dịch chuẩn có nồng độ formaldehyt khoảng 2 µg/ml.

Cho vào sáu bình định mức 10 ml (5.2), mỗi bình 4 ml axetonitril (4.2.2), sau đó lần lượt cho thêm một dãy dung dịch chuẩn nồng độ 0,25 ml; 0,5 ml; 1,0 ml; 2,0 ml; 3,0 ml; 5,0 ml. Ngay sau khi thêm dung dịch formaldehyt, trộn từng bình và cho thêm 0,5 ml dung dịch DNPH (4.2.1). Làm đầy đến vạch mức bằng nước khử khoáng và trộn. Sau ít nhất 60 min, nhưng không quá 180 min, phân tích các mẫu sử dụng HPLC sau khi lọc qua màng lọc (5.10). Ảnh hưởng của việc hiệu chuẩn qua việc xây dựng giản đồ diện tích pic formaldehyt sinh ra theo nồng độ tính bằng µg/10 ml.

6.2.8  Tính hàm lượng formaldehyt có trong mẫu da

Trong đó

w_FA

là lượng formaldehyt thoát ra, tính bằng miligam trên kilôgam (mg/kg), làm tròn đến 0,1 mg/kg;

A_mẫu

...

...

...

A_{mẫu trắng}

là diện tích của mẫu trắng được xác định bằng HPLC với bộ phát hiện UV;

b

là độ dốc của đường cong hiệu chuẩn (10 ml/µg);

D

là hệ số pha loãng, tính bằng mililít (ml), thường là 1; việc pha loãng là cần thiết nếu diện tích xác định của mẫu nằm ngoài phạm vi đường cong hiệu chuẩn;

m

là khối lượng của mẫu da được cân, tính bằng gam (g).

7  Biểu thị kết quả

...

...

...

Nếu kết quả được báo cáo theo khối lượng khô, nhân kết quả trên với hệ số 100/(100-w), trong đó w là hàm lượng ẩm, tính bằng phần trăm, theo TCVN 10048 (ISO 4684). Nếu kết quả được biểu thị theo khối lượng khô, phải nêu chi tiết trong báo cáo thử nghiệm.

Nếu có giá trị đơn lẻ chênh giá trị trung bình quá 20 %, thì phải tiến hành thử thêm hai mẫu thử.

8  Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm bao gồm các thông tin sau:

a) viện dẫn tiêu chuẩn này;

b) loại, nguồn gốc và tên mẫu da được phân tích;

c) giá trị trung bình của formaldehyt thoát ra, tính bằng miligam trên kilôgam, làm tròn đến 0,1 mg/kg;

d) nếu yêu cầu, giá trị trung bình của formaldehyt thoát ra, tính bằng miligam trên kilôgam, làm tròn đến 0,1 mg/kg, được tính theo khối lượng khô và chất bay hơi tính bằng phần trăm;

e) số lượng mẫu được thử;

...

...

...

g) ngày thử;

h) nếu các kết quả được xác định theo khối lượng khô, thì phải nêu trong báo cáo chi tiết này và báo cáo khối lượng khô của mẫu.

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 7535-3:2018 (ISO 17226-3:2011) về Da - Xác định hàm lượng formaldehyt - Phần 3: Xác định formaldehyt thoát ra từ da