Trong đó

A_MCCP-S

là tổng diện tích pic của của MCCPs trong chuẩn hiệu chuẩn;

A_intStd-S

là diện tích của chuẩn nội trong chuẩn hiệu chuẩn;

a

là dộ dốc của hàm tuyến tính

b

là giao của hàm tuyến tính;

...

...

...

là nồng độ của các MCCP trong chất chuẩn hiệu chuẩn, g/ml;

C_int.Std-S

là nồng độ của chất chuẩn nội trong chất chuẩn hiệu chuẩn, g/ml.

Hàm lượng các MCCP trong da được tính theo Công thức (2) theo phần khối lượng, w, tính bằng mg/kg.

(2)

Trong đó:

A_MCCP-mẫu

là tổng diện tích pic của của các MCCP trong mẫu;

...

...

...

là diện tích của chất chuẩn nội trong mẫu;

a

là dộ dốc của hàm tuyến tính

b

là giao của hàm tuyến tính;

V

là thể tích cuối, ml;

m

là khối lượng của mẫu, g;

...

...

...

là nồng độ của chất chuẩn nội trong mẫu/g/ml

9.5  Độ chụm

Với phương pháp này, có thể đạt được giới hạn định lượng 100 mg/kg.

10  Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm các thông tin sau:

a) viện dẫn tiêu chuẩn này;

b) tất cả các chi tiết cần thiết để nhận diện mẫu da được thử;

c) ngày thử;

d) kỹ thuật phân tích đã sử dụng để phát hiện và xác nhận;

...

...

...

f) các sai khác bất kỳ theo thỏa thuận hoặc theo phương pháp khác so với quy trình quy định.

Phụ lục A

(tham khảo)

Các thông số vận hành phân tích sắc ký khí (GC-ECNI-MS)

A.1  Các điều kiện GC-ECNI-MS đề xuất

Cột:

không phân cực (5 % phenyl metyl siloxan, ví dụ DP-5 hoặc tương đương là phù hợp

chiều dài: 25m

...

...

...

độ dày màng: 0,25 m

Khí mang:

heli, tốc độ dòng: 1,2 ml/min

Nhiệt độ buồng bơm

250 °C, không chia dòng, không chia thời gian: 1,5 min

Thể tích bơm

1 μl

Chương trình nhiệt độ

120 °C đến 300 °C tại 12 °C/min, 300 °C trong 5 min

...

...

...

tổng thời gian chạy: 20 min

Điều kiện MS:

Dòng chuyển: 280 °C

Nguồn ion: 150 °C

tứ cực: 120 °C

Điều kiện ion hóa hóa học (CI):

Khi Cl: metan 5,5 (nghĩa là > 99,999 5 % CH₄)

Van Cl: 40 %

A.2  Tối ưu hóa hệ thống GC-ECNI-NIS

...

...

...

A.3  Hiệu chuẩn và tính toán

Bảng A.1 - tín hiệu ion m/z để định lượng và định tính

Số thứ tự

Chất

Định lượng/định tính

1

lindane

325/327

...

...

...

255/253

255/257

2

Các MCCP (C₁₄ đến C₁₇)

403/405

...

...

...

431/433

445/447

Phụ lục B

(tham khảo)

...

...

...

B.1  Giới thiệu

Có thể sử dụng hệ thống sắc ký lỏng ghép khối phổ đơn tứ cực (LC-MS] hoặc ba tứ cực (LC-MS/MS) nếu chứng minh được độ chính xác của phép đo tương đương với độ chính xác của phép đo của phương pháp GC-ECNI-MS

B.2  Thiết bị, dụng cụ và vật liệu

Sử dụng các thiết bị, dụng cụ phòng thí nghiệm thông thường và cụ thể là các thiết bị, dụng cụ sau.

B.2.1  Cân phân tích, cân chính xác đến 0,1 mg.

B.2.2  Lọ kín, có nắp đậy, 20 ml, thích hợp đề chiết bằng hỗn hợp metanol/THF (1:1).

B.2.3  Bể siêu âm, có hệ thống điều nhiệt, có khả năng duy trì nhiệt độ (60 ± 5) °C.

CHÚ THÍCH Tần số 40 KHz là phù hợp.

B.2.4  Pipet

...

...

...

B.2.6  Thiết bị bay hơi, ví dụ máy cô quay bay hơi chân không hoặc thiết bị gia nhiệt kiểm soát dòng khí trên chất lỏng.

B.2.7  Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) ghép đầu dò chọn lọc khối lượng tứ cực (LC-MS/MS)

B.2.8  Màng lọc, ví dụ polyamit, 0,45 μm.

B.3  Thuốc thử

nếu không có quy định khác, chỉ sử dụng các hóa chất cấp tinh khiết phân tích.

B.3.1  Metanol, số CAS 67-56-1.

B.3.2  Tetrahydrofuran (THF), Số CAS 109-99-9.

B.3.3  n-hexan, số CAS 110-54-3.

B.3.4  Các dung dịch chuẩn, MCCP, từ C14 đến C17, với hàm lượng clo khác nhau, nồng độ mỗi dung dịch 100 μg/ml.

...

...

...

B.3.4.2  Các MCCP, từ C₁₄ đến C₁₇, 57 % Cl, cấp tinh khiết kỹ thuật.

CHÚ THÍCH  Các dung dịch hiệu chuẩn MCCP này có bán sẵn trên thị trường.

B.4  Chuẩn bị dung dịch hiệu chuẩn MCCP (50 μg/ml) 55 % Cl

Chuyển 400 μl dung dịch chuẩn các MCCP C₁₄ đến C₁₇ 52 % Cl (B.3.4.1) và 600 μl dung dịch chuẩn các MCCP C₁₄ đến C₁₇ 57 % Cl (B.3.4.2) vào bình định mức 2 ml (B.2.5) và làm đầy đến vạch mức bằng hỗn hợp metanol/THF (1:1). Sử dụng chất chuẩn hiệu chuẩn hàm lượng clo 55 % này để định lượng tất cả các mẫu, không phụ thuộc vào mức độ clo hóa của mẫu.

B.5  Chiết da và chuẩn bị dung dịch phân tích

Cân (0,5 ± 0,001) g mẫu da bằng cân phân tích (B.2. 1), cho vào lọ kín (B.2.2). Thêm 10 ml n hexan (B.3.3) và đậy nắp bình. Chiết mẫu trong (60 ± 2) min ở (60 ± 5) °C trong bể siêu âm (B.2,3).

Thu hồi phần nổi phía trên và cô đặc bằng thiết bị bay hơi (B.2.6) đến khô. Phần cặn được pha đến 2 ml bằng hỗn hợp metanol/THF (1:1). Lọc dung dịch thu được bằng màng lọc polyamit (B.2.8) và cho vào lọ để phân tích HPLC (B.2.7).

B.6  Các thông số thiết bị

Điều kiện LC-MS/MS

...

...

...

Chất rửa giải A: nước

Chất rửa giải B: metanol

Nhiệt độ cột: 35 °C

Chương trình Gradient: nêu trong Bảng B.1.

Bảng B.1 - chương trình Gradient

Thời gian

% A

% B

min

...

...

...

0.01

40

60

15.00

0

100

22.00

40

...

...

...

30.00

Dừng lại (stop)

Dừng lại (stop)

Tốc độ dòng : 2ml/min

Thể tích bơm: 2,0 μl

Quét: 80 Da đến 1000 Da

Chế độ theo dõi chọn lọc ion (SIM): Kết quả được đánh giá là tổng diện tích các tín hiệu SIM được nêu trong Bảng B.2.

Bảng B.2 - ion m/z đối với các MCCP (STD C14 đến C17)

C₁₄H₂₂Cl₈(-)

...

...

...

C₁₄H₂₁Cl₉(-)

507 đến 509

C₁₄H₁₈Cl₁₂(-)

609 đến 611

C₁₄H₁₃Cl₁₇(-)

785 đến 783 đến 787

C₁₅H₂₄Cl₈(-)

487 đến 489

C₁₅H₂₁Cl₁₁(-)

...

...

...

C₁₅H₁₈Cl₁₄(-)

693 đến 695

C₁₅H₁₅Cl₁₇(-)

797 đến 801

C₁₆H₂₇Cl₇(-)

467 đến 469 đến 471

C₁₆H₂₅Cl₉(-)

535 đến 537

C₁₆H₂₀Cl₁₄(-)

...

...

...

C₁₇H₂₈Cl₈(-)

513 đến 515

C₁₇H₂₇Cl₉(-)

549 đến 547 đến 551

C₁₇H₂₂Cl₁₄(-)

719 đến 721

C₁₇H₂₁Cl₁₅(-)

753 đến 755

Để thu được kết quả định lượng, diện tích mỗi pic của sắc ký đồ dịch chiết phải thấp hơn điềm hiệu chuẩn cao nhất. Nếu không, pha loãng dịch chiết với dung dịch IS (8.1) trong khoảng giới hạn hoặc kết luận rằng kết quả lớn hơn kết quả tính toán.

...

...

...

Hình B.1 - Ví dụ sắc ký đồ phân tích các chất MCCP bằng LC-MS/MS

B.7  Tính toán

Hàm lượng các MCCP trong da được tính theo đường chuẩn thu được từ dung dịch hiệu chuẩn các MCCP (B.1) và trong khoảng từ 2,5 μg/ml đến 2D μg/ml.

Kết quả được tính bằng phần khối lượng, w, tính bằng mg/kg theo công thức (B.1):

(B.1)

Trong đó

C_MCCP  là nồng độ các MCCP thu được từ đường chuẩn, μg/ml

...

...

...

m_s  là khối lượng của mẫu, g

Phụ lục C

(tham khảo)

Phương pháp tích phân sử dụng việc đánh giá hình dạng pic (PSE) và GC-ECNI-MS

C.1  Giới thiệu

Phương pháp PSE là phương pháp được chấp nhận để xác định diện tích các pic (9.1) đối với các sắc ký đồ phức tạp. Sắc ký đồ các kết quả phân tích ở tiêu chuẩn này được lấy từ ISO 22818. Hình dạng pic điển hình của sắc ký đồ chất chuẩn hiệu chuẩn được so sánh với sắc ký đồ của các mẫu thử đối với cùng ion m/z.

C.2  Pha loãng

Sắc ký đồ ion tổng (TIC) phải bằng khoảng 55 % dung dịch chuẩn các MCCP (c = 50 μg/ml) liên quan đến độ hấp thụ (chiều cao).

...

...

...

Các pic được đánh giá bằng cách tham chiếu với các pic tương ứng với chuẩn hiệu chuẩn (xem Hình C.1 đến Hình C.4), liên quan đến thời gian lưu, hình dạng pic và tỷ lệ định lượng/định tính như sau:

- phân phối cực đại pic và toàn bộ hình dạng được đánh giá trực quan

- Phải loại bỏ hoàn toàn các pic không khớp, (xem Hình C.4).

- đối với các pic khớp một phần, chỉ tích phân diện tích phù hợp (xem Hình C.3, ví dụ đối với m/z 431).

- các pic khớp được tích phân trong toàn bộ khoảng thời gian lưu của chúng (xem Hình C.2). Nếu phát hiện thấy bất kỳ dấu hiệu chồng lấn hoặc nhiễu rõ ràng nào, chúng phải được loại trừ khỏi tích phân càng nhiều càng tốt.

- Các MCCP chỉ ra tín hiệu thấp đối với m/z 445 và m/z 447 và hình dạng không quá quan trọng. Nếu có hình dạng điển hình đối với các ion của các MCCP, tích hợp các sắc ký đồ của các ion m/z 445 và m/z 447 trong khoảng thời gian lưu của pic chuẩn (xem Hình C.2).

C.4  Tỷ lệ định lượng/định tính

Tỷ lệ định lượng/định tính phải tương ứng với tỉ lệ của chuẩn (chấp nhận sai lệch ± 30%).

C.5  Nhiễu

...

...

...

C.6  Nhiễu của Hình C.1 đến C.4

Hình C.1 chỉ ra việc sử dụng các vết ion chất chuẩn MCCP 55 % Cl.

Hình C.2 nêu các ví dụ các mẫu khớp với chất chuẩn MCCP 55 % Cl.

Hình C.3 nêu các ví dụ các mẫu khớp một phần với chất chuẩn MCCP 55 % Cl.

Hình C.4 nêu các ví dụ các mẫu không khớp với chất chuẩn MCCP 55 %CI.

Hình C.1 - Chất chuẩn các SCCP 55 % Cl, các vết ion khác nhau

Trong các Hình từ Hình C.2 đến Hình C.4, sắc ký đồ trên là sắc ký đồ chất chuẩn, dưới là sắc ký đồ mẫu.

...

...

...

Hình C.3 - Ví dụ các mẫu khớp một phần với chất chuẩn các MCCP 55 %CI, trên là sắc ký đồ chất chuẩn, dưới là sắc ký đồ mẫu

Hình C.4 - Ví dụ các mẫu không khớp với chất chuẩn các MCCP 55 %CI, trên là sắc ký đồ chất chuẩn, dưới là sắc ký đồ mẫu

Thư mục tài liệu tham khảo

[1] ISO 22818, Textiles - Determination of short-chain chlorinated paraffins (SCCP) and middle-chain chlorinated paraffins (MCCP) in textile products out of different matrices by use of gas chromatography negative ion chemical ionization mass spectrometry (GC- NCI-MS)

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13848-2:2023 (ISO 18219-2:2021) về Da - Xác định Hydrocacbon Clo hóa trong da - Phần 2: Phương pháp sắc ký xác định các parafin clo hóa chuỗi mạch trung bình (MCCP).