7. Tính kết quả

Trong phản ứng hình thành cơ sở của phép xác định này là đường tuyến tính thể hiện mối quan hệ giữa lượng NADPH sử dụng hết và chênh lệch độ hấp thụ với nồng độ nitrat.

Tính chênh lệch độ hấp thụ của mẫu trắng ΔA_trắng theo công thức (1):

ΔA_{mẫu trắng} = (A₁ - A₂)_{mẫu trắng} - 2x (A₂ - A₃)_{mẫu trắng}                                                       (1)

Tính chênh lệch độ hấp thụ của dung dịch thử ΔA_{dung dịch thử} theo công thức (2):

ΔA_{dung dịch thử}  = (A₁ - A₂)_{dung dịch thử} - 2x (A₂ - A₃)_{dung dịch thử}                                               (2)

Tính chênh lệch độ hấp thụ của mẫu trắng ΔA cho giá trị trắng theo công thức (3):

ΔA = ΔA_{dung dịch thử} - ΔA_{mẫu trắng}                                                                                                                                                               (3)

Tính nồng độ chất trong dung dịch đã pha loãng dùng các phép đo hấp thụ quang theo định luật Beer- Lambert.

...

...

...

                                                                           (4)

trong đó

ΔA

là chênh lệch độ hấp thụ trong công thức (3);

M

là khối lượng phân tử tương đối của ion nitrat (M = 62,0 g/mol);

V₁

là tổng thể tích dung dịch mẫu (6.2.1) (V₁ = 100 ml), tính bằng mililit (ml);

V₂

...

...

...

V₃

là tổng thể tích dung dịch thử (6.2.2) (V₃ = 3,20 ml), tính bằng mililit (ml);

F

là hệ số pha loãng (F = 1);

m

là khối lượng mẫu ban đầu, tính bằng gam (g);

e

là độ hấp thụ phân tử của NADPH, nghĩa là 6,3 x 10³ l.mol^-1.cm^-1 ở 340 nm, 3,5 x 10 ³l. mol^-1.cm^-1 ở 365 nm (Hg), 6,18 x 10³ l.mol^-1.cm^-1 ở 334 nm (Hg);

d

...

...

...

Nếu dùng phương án theo Bảng 1 và dung dịch mẫu không phải pha loãng, thì tính phần khối lượng w của nitrat, bằng miligam trên kilogam mẫu, theo công thức (5):

                                                                  (5)

trong đó:

ΔA xem công thức (3);

e và m xem công thức (4).

Báo cáo kết quả theo miligam trên kilogam hoặc miligam trên lít theo số nguyên và ghi theo quy định hiện hành.

8. Độ chụm

Các chi tiết của phép thử liên phòng thử nghiệm của phương pháp này được nêu trong Phụ lục A Các giá trị thu được từ phép thử liên phòng thử nghiệm này có thể không áp dụng được cho các dải nồng độ của chất phân tích và chất nền khác với các dải nồng độ của chất phân tích và chất nền đã nêu.

8.1. Độ lặp lại

...

...

...

Các giá trị đó là:

Sản phẩm rau chân vịt (spinach)              = 64 mg/kg               r = 15,5 mg/kg

Nước cà rốt                                           = 200 mg/l                r = 12,2 mg/l

8.2. Độ tái lập

Chênh lệch tuyệt đối giữa các kết quả của hai phép thử đơn lẻ độc lập, thu được trên vật liệu thử giống hệt nhau, do hai phòng thử nghiệm khác nhau thực hiện, trong không quá 5 % trường hợp vượt quá giá trị tái lập R sau đây:

Các giá trị đó là:

Sản phẩm rau chân vịt (spinach)              = 64 mg/kg               R = 24,5 mg/kg

Nước cà rốt                                           = 200mg/l                 R = 17,7 mg/l

9. Báo cáo thử nghiệm

...

...

...

Phụ lục A

(Tham khảo)

Dữ liệu về độ chụm

Các thông số sau đây đã thu được trong hai phép thử liên phòng thử nghiệm [1], [2] phù hợp với ISO 5725:1986 [5]*. Các phép thử này do Max von Pettenkofer-lnstitute thuộc Cơ quan Y tế Liên bang, Cục Hóa chất Thực phẩm, Berlin, Đức thực hiện.

Bảng A.1 - Dữ liệu về độ chụm

Rau chân vịt

Nước ép cà rốt

...

...

...

1988

1992

Số lượng mẫu

1

1

Số lượng phòng thử nghiệm

19

9

Số lượng phòng thử nghiệm còn lại sau khi trừ ngoại lệ

...

...

...

7

Số lượng ngoại lệ

3

2

Số lượng kết quả chấp nhận

80

35

Giá trị trung bình

64 mg/kg

...

...

...

Đô lệch chuẩn lặp lại, s_r

5,5 mg/kg

4 mg/l

Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, RSD_r

8,7 %

2,1 %

Giới hạn lặp lại, r

15,5 mg/kg

12,2 mg/l

...

...

...

8,7 mg/kg

6 mg/l

Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, RSD_R

13,6%

3,3 %

Giới hạn tái lập, R

24,5 mg/kg

17,7 mg/l

...

...

...

[1] Untersuchung von Lebensmitteln: Bestimmung von Nitrat in Gemtisesaften: L 26.26-2 1088-06 (Food Analysis: Determination of nitrate in vegetable Juices: L 26.26-21988-05) in: Amtitiche Sammtung von Ihuersuckitnasverfahren nach § 35LMBG: Verfahren zur Probenahme und Untersuchung von lebensmittteln, TaboJcerxeugnissen, hosmetisdien Mittetn und Bedaifsgegensltinden und Bedarfsgegenssundheitsamt (In: Collection of official methods under article 35 of the German Federal Foods Act; Methods of Sampling and analysis of foods, tobacco products, cosmetics and commodity goods/Federal Health Office) Losebbiiausgabe, Stand Aug. 1993 Bd 1 (Loose leaf edition, as of 1993-08 Vol.1) Berlin, Kohu Beuth Verlag GmbH.

[2] Untersuchung von Lebensmitteln: Bestimmung von Nitrat in Gemiisebrei fur Saugltnge und Kleinkinder L 48.03.05-11988-05 (Food Analysis Determination of nitrate in mashed vegetables for babies and infants: L 48.03.05-11988-05) in: AmUiche Sommlung von Untersuchungsverfahren nacft § 35LMBG: Verfahren zur Probenahme und IhUersuchung von LebensmiUetn, labakerzeugnissen, kosmeUschen Mitteln und Bed^rfsgegenstanden/Bimdf^tmAd^iisamt (In: Collection of official methods under article 35 of the German Federal Foods Act; Methods of Sampling and analysis of foods, tobacco products, cosmetics and commodity goods/Fedacal Health Office) Loseblattausgabe, Stand Aug. 1993 Bd. 1 (Loose leaf edition, as of 1993-08 Vol 1.) Berlin, Kola Beuth Verlag GmbH.

[3] BeuUer, H.-O., Wurst, B., and Fischer, S.,: Eine neue Methode zur enzymatischen Bestimmung von Nitrat in Lebensmitteln (A new method for the enzymatic determination of nitrate in foodstuffs), In: DL Lebensm. Bundsch. 82,1986, 283-289

[4] Enzyme commission (EQ: Classification System. Enzyme Handbook, Springer Berlin 1969

[5] ISO 5725:1986 Precision of test methods - Determination of repeatability and reproducibility for a standard test method by inter-laboratory tests.

1) c là nồng độ chất.

2) Những bộ thuốc thử này có bán sẵn trên thị trường. Khi sử dụng nên theo hướng dẫn của nhà sản xuất

3) Đơn vị U (là đơn vị quốc tế hay đơn vị chuẩn) được xác định là lượng enzym xúc tác quá trình chuyển hóa 1 mmol chất nền mỗi phút dưới điều kiện chuẩn.

* ISO 5725:1986 hiện nay đã hủy.

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN8160-5:2010 (EN 12014-5:1997) về Thực phẩm - Xác định hàm lượng nitrat và/hoặc nitrit - Phần 5: Xác định hàm lượng nitrat trong thực phẩm chứa rau dành cho trẻ sơ sinh và trẻ nhỏ bằng phương pháp enzym