CHÚ THÍCH: Thời gian ổn định là 5 min. Có thể đặt ở bước sóng 355 nm.

Thời gian lưu của oxytetracyclin là 10,8 min; tetracyclin là 11,6 min; clotetracyclin là 13,8 min; doxycylin là 14,4 min.

6.4 Dựng đường chuẩn

Trước khi bơm dung dịch chuẩn cần ổn định cột sắc ký trong 30 min bằng pha động, sau đó bơm chính xác 100 μl các dung dịch chuẩn làm việc (3.10.3) theo thứ tự nồng độ từ thấp đến cao vào máy sắc ký HPLC (4.1) ở điều kiện phân tích để xây dựng đường chuẩn và xác định giới hạn phát hiện của máy. Đường chuẩn biểu thị mối quan hệ giữa các chiều cao pic thu được và nồng độ (μg/ml) từng loại kháng sinh theo quan hệ tuyến tính:

y = ax + b

Trong đó:

y là diện tích pic (chiều cao pic của chất chuẩn);

x là nồng độ tương ứng chất chuẩn, tính bằng microgam trên mililit (μg/ml); a và b là hệ số trong phương trình tuyến tính.

7. Tính và biểu thị kết quả

...

...

...

Nồng độ cuối cùng của từng kháng sinh nhóm tetracyclin trong mẫu trắng thêm chuẩn, C_f, tính từ phương trình đường chuẩn (6.4) theo công thức:

Trong đó:

Yt là diện tích pic của mẫu trắng thêm chuẩn;

a là hệ số góc của đường chuẩn;

b là hằng số của đường chuẩn.

Độ thu hồi, R, được xác định theo công thức:

Trong đó:

...

...

...

C_t là nồng độ thực (nồng độ chuẩn cho vào mẫu trắng);

f là hệ số pha loãng của mẫu trắng thêm chuẩn.

Kết quả xác định độ thu hồi được chấp nhận nếu độ thu hồi đạt được giới hạn sau:

R_m - 3.SD ≤ R ≤ R_m + 3.SD

Trong đó:

Rm là độ thu hồi trung bình;

SD là độ lệch chuẩn của độ thu hồi trung bình.

7.2 Tính kết quả

Dư lượng của từng kháng sinh nhóm tetracyclin (oxytetracyclin, tetracyclin, clotetracyclin, doxycylin) trong mẫu thử, X, tính bằng microgam trên kilogam (μg/kg), được tính theo công thức:

...

...

...

Trong đó:

Cf là nồng độ cuối cùng của từng kháng sinh nhóm tetracyclin trong mẫu trắng thêm chuẩn;

R là độ thu hồi, được xác định từ mẫu trắng thêm chuẩn theo 7.1;

F là hệ số pha loãng mẫu.

7.3 Biểu thị kết quả

Kết quả được biểu thị đến một số thập phân.

8. Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ:

- mọi thông tin cần thiết về việc nhận biết đầy đủ mẫu thử;

...

...

...

- phương pháp thử đã sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này;

- mọi chi tiết thao tác không quy định trong tiêu chuẩn này, cùng với các chi tiết bất thường nào  khác có thể ảnh hưởng tới kết quả thử nghiệm;

- kết quả thử nghiệm thu được.

THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1] AFSSA - Fougères (Pháp). Determination of Tetracyclines residues in kidney and muscle by

HPLC.

[2] AOAC Official Method 995.09. Tetracycline, Oxytetracycline and Chlortetracycline in Edible

Animal Tissues.

...

...

...

Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 8748:2011 về thịt và sản phẩm thịt - Phương pháp xác định dư lượng tetracyclin bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao