PHỤ LỤC C

(qui định)

MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY VÀ THUỐC THỬ

C.1 Môi trường canh thang dinh dưỡng

C.1.1 Thành phần

Dịch chiết thịt bò

3,0 g

Pepton từ thịt

...

...

...

Nước

1 000 ml

C.1.2 Chuẩn bị

Hòa tan các thành phần cơ bản hoặc môi trường hoàn chỉnh khô trong nước, bằng cách đun sôi, nếu cần.

Chỉnh pH sao cho sau khi khử trùng pH của môi trường hoàn chỉnh là 7,0 ± 0,2 ở 25^oC, nếu cần. Chia vào các ống (6.7) mỗi ống 5ml. Khử trùng môi trường 15 min ở 121^oC trong nồi hấp áp lực.

C.2. Môi trường thạch dinh dưỡng và thạch dinh dưỡng bổ sung 0,7 % natri bicacbonat

C.2.1. Môi trường thạch dinh dưỡng

C.2.1.1. Thành phần

Canh thang dinh dưỡng (C.1)

...

...

...

Thạch

18 g đến 20 g

C.2.1.2. Chuẩn bị

Hòa tan các thành phần cơ bản hoặc môi trường hoàn chỉnh khô trong nước, bằng cách đun sôi, nếu cần.

Chỉnh pH sao cho sau khi khử trùng pH của môi trường hoàn chỉnh là 7,0 ± 0,2 ở 25^oC, nếu cần. Chia vào các đĩa petri (6.8), mỗi đĩa 15 ml đến 20 ml hoặc vào các ống (6.7), mỗi ống 5 ml, để ống nằm nghiêng. Khử trùng môi trường 15 min ở 121^oC trong nồi hấp áp lực.

C.2.2. Thạch dinh dưỡng bổ sung 0,7 % natri bicacbonat

C.2.2.1. Thành phần

Dịch chiết thịt bò

3,0 g

...

...

...

5,0 g

Thạch

12,0 g đến 15,0 g

Natri bicacbonat (7%)

100 ml

Nước

900 ml

C.2.2.2. Chuẩn bị

Hòa tan các thành phần cơ bản hoặc môi trường hoàn chỉnh khô trong 900 ml nước, bằng cách đun sôi, khử trùng 15 min trong nồi hấp áp lực ở 121^oC, giữ ở 50^oC trong nồi cách thủy (6.1), cho thêm 100 ml dung dịch natri bicacbonat 7 % đã qua 2 lần lọc vô trùng (qua màng lọc cỡ lỗ 0,22 µm đến 0,45 µm). Trộn đều hỗn hợp này rồi đổ vào các đĩa petri (6.8) mỗi đĩa từ 15 ml đến 20 ml.

...

...

...

C.3.1. Thành phần

Môi trường thạch dinh dưỡng (C.2.1)

100 ml

Máu thỏ hay máu cừu vô khuẩn (đã khử fibrin)

10 ml

C.3.2. Chuẩn bị

Đun nóng cho tan môi trường thạch. Khi nhiệt độ xuống còn 45^oC, cho máy vào trộn đều, chia vào các đĩa vô khuẩn, mỗi đĩa từ 15 ml đến 20ml.

C.4. Nước muối đẳng trương

C.4.1. Thành phần

...

...

...

8,5 g

Nước cất

1 000 ml

C.4.2. Chuẩn bị

Hòa tan natri clorua. Hấp ở 121^oC trong 20 min.

C.5. Thuốc nhuộm Gram

C.5.1. Dung dịch tím tinh thể

C.5.1.1. Thành phần

Tím tinh thể

...

...

...

Etanol 95 %

20 ml

C.5.1.2. Chuẩn bị

Hòa tan 2 g tím tinh thể trong 20 ml etanol 95%

C.5.2. Dung dịch amoni oxalat

C.5.2.1. Thành phần

Amoni oxalat (NH₄)₂C₂O₄:H₂O

0,8 g

Nước cất

...

...

...

C.5.2.2. Chuẩn bị

Hòa 0,8g amoni oxalat vào 80 ml nước cất.

Trộn hỗn hợp các dung dịch thể và amoni oxalat. Sau 24h, lọc dung dịch qua giấy lọc và bảo quản dung dịch tránh ánh sáng.

C.5.3. Dung dịch iôt

C.5.3.1. Thành phần

Iôt

1,0 g

Kali iodua (Kl)

2,0 g

...

...

...

300 ml

C.5.3.2. Chuẩn bị

Hòa tan kali iodua trong 5 ml nước. Thêm iôt, lắc mạnh cho tan, sau đó bổ sung phần nước còn lại. Bảo quản dung dịch tránh ánh sáng.

C.5.4. Dung dịch safranin

C.5.4.1. Thành phần

Safranin

0,25 g

Etanol 95 %

10 ml

...

...

...

90 ml

C.5.4.2. Chuẩn bị

Hòa tan safranin trong etanol. Thêm nước cất, lắc mạnh cho tan. Bảo quản dung dịch tránh ánh sáng.

C.5.5. Dung dịch tẩy màu: Etanol 95 %

C.6. Thuốc nhuộm Wright

C.6.1. Thành phần

Bột nhuộm Wright

0,1 g

Glyxerin lỏng thuần khiết

...

...

...

Metanol (CH₃OH)

60 ml

C.6.2. Chuẩn bị

Nghiền nhuyễn bột nhuộm Wright cùng với glyxerin, rồi bổ sung metanol. Sau một tuần, lọc dung dịch qua giấy lọc và bảo quản tránh ánh sáng.

THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1] TCVN 7925:2008 (ISO 17604:2003) Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi – Lấy mẫu thân thịt để phân tích vi sinh.

WHO/EMC/ZDI/98.6

[2] Guidelines for the Surveilance and Control of Anthrax in Humans and Animals, 6.Bacteriology; Appendix I-Methods; Appendix II-Media and Reagents.

...

...

...

Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 5154:2009 về vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Phương pháp phát hiện Bacillus anthracis