Kiểm tra tính ổn định của hệ thống sắc ký, bơm vài lần dung dịch chuẩn (3.7.2) 1,0 µg/ml vào hệ thống, cho đến khi đạt được độ ổn định của diện tích các pic và thời gian lưu.

7.3.2  Dựng đường chuẩn

Bơm từng dung dịch chuẩn (3.7.2) để xác định diện tích pic/chiều cao pic tương ứng với mỗi nồng độ. Dựng đường chuẩn với trục tung là giá trị diện tích/chiều cao các pic của các dung dịch chuẩn, trên trục hoành là nồng độ tương ứng, µg/ml, của dung dịch chuẩn.

7.3.3  Dung dịch mẫu thử

Bơm mẫu đã chiết (7.2.1 hoặc 7.2.2) ít nhất 2 lần vào hệ thống sắc ký, thể tích mẫu bơm tương tự như thể tích dung dịch chuẩn và xác định diện tích/chiều cao pic DNC.

8  Tính và biểu hiện kết quả

Tính hàm lượng nicarbazin có trong mẫu thử, w_E, biểu thị bằng mg/kg theo công thức sau:

Trong đó:

...

...

...

ρ_n là hàm lượng nicarbazin trong dịch chiết mẫu, µg/ml;

m là khối lượng mẫu thử, tính bằng gam;

f_d là hệ số pha loãng đã áp dụng để chuẩn bị dịch chiết mẫu cuối cùng.

9  Độ chụm

9.1  Nghiên cứu cộng tác

Chi tiết nghiên cứu cộng tác của phương pháp này được tóm tắt trong Phụ lục A. Các giá trị thu được từ nghiên cứu cộng tác này có thể không áp dụng cho dải nồng độ và nền mẫu khác với dải nồng độ và nền mẫu đã cho.

9.2  Độ lặp lại

Chênh lệch tuyệt đối giữa hai kết quả thử độc lập, thu được bằng cách sử dụng cùng một phương pháp, trên cùng một vật liệu thử trong cùng một phòng thí nghiệm do cùng một người thực hiện, sử dụng cùng một thiết bị, trong một khoảng thời gian ngắn, không quá 5 % các trường hợp vượt quá giới hạn lặp lại r.

9.3  Độ tái lập

...

...

...

9.4  Độ thu hồi

Độ thu hồi đạt được đối với thức ăn hỗn hợp phải nằm trong dải từ 90 % đến 110 % mức bổ sung, trong khoảng 20 mg/kg và 200 mg/kg.

10  Báo cáo kết quả thử nghiệm

Báo cáo kết quả thử nghiệm phải ghi rõ:

a) Thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ về mẫu thử;

b) Phương pháp lấy mẫu được sử dụng, nếu biết;

c) Phương pháp thử được sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này;

d) Các chi tiết thao tác không quy định trong tiêu chuẩn này, hoặc được coi là tùy chọn, cùng với các chi tiết về bất kỳ sự cố bất kỳ có thể ảnh hưởng đến kết quả thử nghiệm;

e) Kết quả thử nghiệm thu được hoặc nếu kiểm tra độ lặp lại thì nêu kết quả cuối cùng thu được.

...

...

...

Phụ lục A

(Tham khảo)

Kết quả nghiên cứu liên phòng thí nghiệm

Một nghiên cứu liên phòng thí nghiệm của Châu Âu gồm 19 phòng thí nghiệm ở 8 quốc gia được thực hiện trên các mẫu:

Mẫu A: thức ăn cho gà thịt I, 6 % chất béo;

Mẫu B: thức ăn cho gà thịt II, 1 % chất béo;

Mẫu C: thức ăn cho gà thịt II, 11 % chất béo;

Mẫu D: thức ăn cho gà thịt I, 6 % chất béo;

Mẫu E: premix làm thức ăn cho gà thịt.

...

...

...

Bảng A.1 - Dữ liệu về độ chụm

Mẫu

A

B

C

D

E

Số lượng phòng thí nghiệm tham gia

...

...

...

19

19

19

17

Số lượng phòng thí nghiệm còn lại sau khi trừ ngoại lệ

17

18

18

16

...

...

...

Trung bình tỷ lệ khối lượng nicarbazin, mg/kg

22,0

45,0

117

260

7308

Độ lệch chuẩn lặp lại, s_r, mg/kg

2,2

3,2

...

...

...

6,8

417

Hệ số biến thiên lặp lại, Cv_r, %

10,2

7,1

6,0

2,6

5,7

Giới hạn lặp lại r (2,8 x s_r), mg/kg

...

...

...

9,0

19,7

18,9

1166

Độ lệch chuẩn tái lập, s_R, mg/kg

2,7

4,1

9,2

12,5

...

...

...

Hệ số biến thiên tái lập, Cv_R, %

12,3

9,1

7,9

4,8

8,6

Giới hạn tái lập R (2,8 x s_R), mg/kg

7,6

11,5

...

...

...

34,9

1760

Giá trị HorRat^a

1,22

1,00

1,01

0,70

1,95

HorRat là hệ số giữa RSD_R được xác lập và RSD_R dự đoán trước.

...

...

...

Thư mục tài liệu tham khảo

[1] ISO 6497, Animal feeding stuffs - Sampling (ISO 6497:2002)

[2] ISO 6498, Animal feeding stuffs - Preparation of test samples

[3] ISO 3696, Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987)

[4] J.J.M. Driessen, M.J.H. Tomassen and J. de Jong, CANFAS - Collaborative study for the determination of nicarbazin in feedingstuffs and premixtures by HPLC, Report 2002.012, state Institute for Quality Control of Agricultural Products (RIKILT), 2002

[5] J.J.M. Driessen, M.J.H. Tomassen and J. de Jong, CANFAS - 2nd Collaborative study for the determination of nicarbazin in feedingstuffs and premixtures by HPLC, Report 2002.007, State Institute for Quality Control of Agricultural Products (RIKILT), 2002

[6] EU project 'Development and validation of HPLC methods for the official control of coccidiostats and antibiotics used as feed additives', CANFAS-SMT-4-CT98-2216

[7] Jacob de Jong et al., Liquid chromatographic method for nicarbazin in broiler feeds and premixtures: Development, validation, and interlaboratory study, J. of AOAC Int., 87, 6, 1269 - 1277, 2004.

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12601:2018 (EN 15782:2009) về Thức ăn chăn nuôi - Xác định nicarbazin bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao