Trong đó:

h_d,s  là chiều cao (diện tích) pic của diclazuril trong dung dịch mẫu (8.2.1);

h_i,s  là chiều cao (diện tích) pic của chất chuẩn nội trong dung dịch mẫu thử (8.2.1);

h_d,c là chiều cao (diện tích) pic của diclazuril trong dung dịch hiệu chuẩn (4.10);

h_i,c là chiều cao (diện tích) pic của chất chuẩn nội trong dung dịch hiệu chuẩn (4.10);

c_d,c là nồng độ diclazuril trong dung dịch hiệu chuẩn, tính bằng microgam trên mililit (μg/ml);

m  là khối lượng của phần mẫu thử, tính bằng gam (g);

V  là thể tích của dịch chiết mẫu theo 8.2.1 (trường hợp này là 2,5 ml).

9.2. Premix

...

...

...

w

=

h_d,s x h_i,c

x

c_d,c x 0,02V x p

(mg/kg)

h_i,s x h_d,c

m

Trong đó:

...

...

...

h_i,c là chiều cao (diện tích) pic của chất chuẩn nội trong dung dịch hiệu chuẩn (4.10);

h_d,s  là chiều cao (diện tích) pic của diclazuril trong dung dịch mẫu (8.2.2);

h_i,s  là chiều cao (diện tích) pic của chất chuẩn nội trong dung dịch mẫu thử (8.2.2);

c_d,c  là nồng độ diclazuril trong dung dịch hiệu chuẩn, tính bằng microgam trên mililit (3.10);

m  là khối lượng của phần mẫu thử, tính bằng gam (g);

V  là thể tích của dịch chiết mẫu theo 8.2.2 (trường hợp này là 25 ml);

p là hàm lượng danh định của diclazuril trong premix, tính bằng millgam trên kilogam (mg/kg).

10. Đánh giá xác nhận kết quả

10.1. Nhận biết

...

...

...

10.1.1. Đồng sắc kí

Bổ sung một thể tích thích hợp dung dịch hiệu chuẩn (4.10) vào dịch chiết mẫu (8.2.1 hoặc 8.2.2). Lượng dicrazuril bổ sung phải xấp xỉ lượng dicrazuril dự kiến tìm thấy trong dịch chiết mẫu.

Chỉ có chiều cao pic dicrazuril và pic chất chuẩn nội tăng sau khi tính cả lượng bổ sung và độ pha loãng của dịch chiết. Sai khác về chiều rộng pic tại điểm giữa chiều cao phải nằm trong phạm vi ± 10 % chiều rộng ban đầu của pic diclazuril hoặc pic chất chuẩn nội trong dịch chiết mẫu không thêm chuẩn.

10.1.2. Detector mảng diot

Các kết quả được đánh giá theo các tiêu chí sau:

a) tại bước sóng tương ứng với độ hấp thụ cực đại, phổ đồ của mẫu và của chất chuẩn, được ghi lại ở đỉnh cao nhất trên sắc kí đồ, phải giống nhau trong một biên độ được xác định bằng khả năng phân giải của hệ thống detector. Đối với detector mảng diot, biên độ đặc trưng là ± 2 nm;

b) tại bước sóng từ 230 nm đến 320 nm, phổ đồ của mẫu và của chất chuẩn được ghi lại ở đỉnh cao nhất trên sắc kí đồ không được khác với các phần phổ đồ trong khoảng từ 10 % đến 100 % độ hấp thụ tương đối. Tiêu chí này đáp ứng khi có cùng phổ cực đại và độ lệch giữa hai phổ không vượt quá 15 % độ hấp thụ của chất phân tích chuẩn;

c) tại bước sóng từ 230 nm đến 320 nm, phổ đồ của điểm uốn lên, đỉnh cao nhất và điểm uốn xuống của pic chất phân tích không được khác với các phần phổ đồ trong khoảng từ 10 % đến 100 % độ hấp thụ tương đối. Tiêu chí này đáp ứng khi có cùng phổ cực đại và độ lệch giữa hai phổ không vượt quá 15 % độ hấp thụ tương ứng với phổ đồ của đỉnh cao nhất.

Nếu một trong các tiêu chí này không đáp ứng thì không xác nhận được sự có mặt của chất phân tích trong mẫu.

...

...

...

11.1. Độ lặp lại

Chênh lệch giữa kết quả của hai phép xác định song song, thực hiện trên cùng một mẫu không được vượt quá:

- 30 % giá trị cao hơn (trong hai kết quả của hai phép xác định nêu trên), khi hàm lượng diclazuril từ 0,5 mg/kg đến 2,5 mg/kg;

- 0,75 mg/kg, khi hàm lượng diclazuril từ 2,5 mg/kg đến 5 mg/kg;

- 15 % giá trị cao hơn, khi hàm lượng diclaztiril lớn hơn 5 mg/kg.

11.2. Độ thu hồi

Đối với các mẫu thức ăn chăn nuôi (mẫu trắng) được thêm chuẩn, độ thu hồi ít nhất là 80 %.

12. Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ:

...

...

...

b) phương pháp lấy mẫu đã sử dụng, nếu biết;

c) phương pháp thử đã dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này;

d) mọi điều kiện thao tác không quy định trong tiêu chuẩn này, hoặc được coi là tùy chọn, cùng với mọi tình huống bất thường có thể ảnh hưởng đến kết quả;

e) kết quả thử nghiệm thu được hoặc nếu đáp ứng yêu cầu về độ lặp lại thì ghi kết quả cuối cùng thu được.

PHỤ LỤC A

(Tham khảo)

Kết quả của phép thử nghiệm cộng tác

Một nghiên cứu cộng tác đã được tổ chức thực hiện trên năm mẫu phân tích được phân tích bởi 11 phòng thí nghiệm. Các mẫu này gồm có hai mẫu premix; một mẫu được trộn với chất hữu cơ (O 100) và một mẫu khác được trộn với chất vô cơ (A 100). Hàm lượng diclazuril lý thuyết là 100 mg/kg. Ba mẫu thức ăn hỗn hợp cho chim được thực hiện bằng ba quy trình khác nhau (NL) (L1/Z1/K1). Hàm lượng diclazuril lý thuyết là 1 mg/kg. Các phòng thí nghiệm thực hiện phân tích từng mẫu một hoặc phép thử lặp lại.

...

...

...

Bảng A.1 - Kết quả của phép thử nghiệm cộng tác

Mẫu 1

A 100

Mẫu 2

O 100

Mẫu 3

L1

Mẫu 4

...

...

...

Mẫu 5

K1

Số lượng phòng thử nghiệm

11

11

11

11

6

Số lượng kết quả đơn lẻ

...

...

...

18

19

19

12

Giá trị trung bình [mg/kg]

100,8

103,5

0,89

1,15

...

...

...

Độ lệch chuẩn lặp lại, s_r [mg/kg]

5,88

7,64

0,15

0,02

0,03

Hệ số biến thiên lặp lại, CV_r [%]

5,83

7,38

...

...

...

1,92

3,34

Độ lệch chuẩn tái lập, s_R [mg/kg]

7,59

7,64

0,17

0,11

0,12

Hệ số biến thiên tái lập, CV_R [%]

...

...

...

7,38

18,61

9,67

13,65

Hàm lượng danh nghĩa [mg/kg]

100

100

1

1

...

...

...

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 10810:2015 về Thức ăn chăn nuôi - Xác định hàm lượng diclazuril - Phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao