CHÚ THÍCH Tùy thuộc vào dầu hoặc chất béo được phân tích, mà dự kiến có các steradiene và các steratriene. Việc nhận biết các pic có thể thực hiện bằng cách bơm mẫu dầu tinh luyện hoặc chất béo hoặc bằng chính chất chuẩn stigmastadiene. Ở các điều kiện sắc kí đã cho, sắc ký đồ của dầu chưa qua xử lý (chưa tẩy trắng) không cho thấy có bất kỳ các pic nào trong phần sắc đồ có các steradiene sẽ được dự kiến.

10. Biểu thị kết quả

10.1. Chất chuẩn ngoại

Tính hàm lượng của các stigmastadiene hoặc steradiene, w, tính bằng miligam trên kilôgam, theo hàm lượng của cholestadiene trong chất chuẩn ngoại, như sau:

Trong đó

As là diện tích của pic stigmasta-3,5-diene hoặc diện tích của các pic steradiene;

M là khối lượng của cholesta-3,5-diene (chất chuẩn ngoại) (5.8.2.1) được bơm, tính bằng microgam (mg);

Ac là diện tích của pic cholesta-3,5-diene (chất chuẩn ngoại: nếu pic bị phân tách thì lấy tổng của các diện tích như trong Phụ lục B);

...

...

...

f là hệ số pha loãng (dùng cho thể tích mẫu 500 ml và thể tích bơm 20ml, f =25).

Độ tinh khiết của cholestadiene sử dụng phải được kiểm tra (xem 5.8.3) và phải đạt tối thiểu 95 %. Sau đó không cần hiệu chính. Nếu không, phải hiệu chính khối lượng. Sử dụng cùng một hệ số đáp ứng đối với cholestadiene và cholestane.

Báo cáo kết quả đến hai chữ số thập phân.

10.2. Chất chuẩn nội

Tính hàm lượng của các stigmastadiene hoặc steradiene, w’, biểu thị bằng miligam trên kilôgam, theo hàm lượng của cholestadiene trong chất chuẩn nội, như sau:

Trong đó

As’ là diện tích của pic stigmasta-3,5-dien hoặc diện tích của các pic steradiene;

M’ là khối lượng của cholesta-3,5-dien (chất chuẩn nội) được thêm vào (5.8.2.2), tính bằng microgam (mg);

...

...

...

m’ là khối lượng của dầu được lấy (8.3), tính bằng gam (g).

Độ tinh khiết của cholestadiene sử dụng phải được kiểm tra (xem 5.8.3) và phải đạt tối thiểu 95 %. Sau đó không cần hiệu chính. Nếu không, phải hiệu chính khối lượng. Sử dụng cùng một hệ số đáp ứng đối với cholestadiene và cholestane.

Báo cáo kết quả đến hai chữ số thập phân.

11. Độ chụm

11.1. Phép thử liên phòng thử nghiệm

Các chi tiết của phép thử liên phòng thử nghiệm về độ chụm được nêu trong Phụ lục A. Các giá trị thu được từ phép thử liên phòng thử nghiệm này có thể không áp dụng cho các dải nồng độ và các nền mẫu khác với các dải nồng độ và các nền mẫu đã nêu.

11.2. Độ lặp lại

Chênh lệch tuyệt đối giữa hai kết quả thử nghiệm độc lập, riêng rẽ, thu được khi sử dụng cùng một phương pháp thử, tiến hành trên cùng một vật liệu thử, thực hiện trong cùng một phòng thử nghiệm, do một người phân tích, sử dụng cùng thiết bị, trong một khoảng thời gian ngắn, không được quá 5 % các trường hợp vượt quá giá trị, r, nêu trong Bảng A.1, Phụ lục A.

11.3. Độ tái lập

...

...

...

12. Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm phải ít nhất bao gồm các thông tin sau đây:

a) mọi thông tin cần thiết về nhận biết đầy đủ về mẫu thử;

b) phương pháp lấy mẫu đã sử dụng, nếu biết;

c) phương pháp thử đã sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này;

d) mọi chi tiết thao tác không quy định trong tiêu chuẩn này, hoặc được coi là tuỳ chọn, cùng với mọi tình huống bất thường có thể ảnh hưởng đến kết quả.

e) kết quả thử nghiệm thu được;

f) nếu đáp ứng yêu cầu về độ lặp lại thì nêu kết quả cuối cùng thu được.

...

...

...

(Tham khảo)

Các kết quả của phép thử liên phòng thử nghiệm

Độ chụm của phương pháp đã được thiết lập bởi phép thử liên phòng thử nghiệm quốc tế, tiến hành theo TCVN 6910-1 (ISO 5725-1) và TCVN 6910-2 (ISO 5725-2) do Đức tổ chức năm 1998, thử nghiệm trên năm mẫu khác nhau trong đó có 15 phòng thử nghiệm tham gia.

Bảng A.1 – Kết quả của phép thử liên phòng thử nghiệm

Mẫu

Dầu ôliu nguyên chất

Dầu ôliu nguyên chất có lượng dầu ôliu tinh luyện khác nhau

A

B

...

...

...

D

E

Số lượng các phòng thử nghiệm tham gia

15

15

15

15

15

Số lượng các phòng thử nghiệm được giữ lại sau khi trừ ngoại lệ

...

...

...

15

14

15

15

Giá trị trung bình (mg/kg)

0,01

0,11

0,18

0,32

...

...

...

Độ lệch chuẩn lặp lại (s_r), mg/kg

0,000

0,015

0,012

0,021

0,011

Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại, %

0

13

...

...

...

9

7

Giới hạn lặp lại (r) [s_r x 2,8], mg/kg

0,000

0,042

0,034

0,059

0,031

Độ lệch chuẩn tái lập (s_R) mg/kg

...

...

...

0,034

0,056

0,100

0,034

Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, %

144

30

31

31

...

...

...

Giới hạn tái lập (R) [s_R x 2,8], mg/kg

0,044

0,096

0,155

0,2794

0,095

Phụ lục B

(Tham khảo)

...

...

...

Nhận biết pic

Pic 1a/1 (17,5 min/20,3 min) cholestane

Pic 2 (21,8 min) campestadiene chính

Pic 3 (23,6 min) stigmastadiene

CHÚ THÍCH Một số cột không tách pic 1 a và 1.

Sắc ký đồ A: dầu ôliu nguyên chất đặc biệt, không phát hiện có các stigmastadiene

Sắc đồ B: dầu ô liu có các stigmastadiene hàm lượng 0,25 mg/kg

Sắc ký đồ C: dầu ôliu tinh luyện một phần có hàm lượng 2,5 mg/kg

...

...

...

THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO

1] TCVN 2625:2007 (ISO 5555:2001), Dầu mỡ động vật và thực vật – Lấy mẫu

[2] TCVN 6910-1:2001 (ISO 5725-1:1994), Độ chính xác (độ đúng và độ chụm) của phương pháp đo và kết quả đo – Phần 1: Nguyên tắc và định nghĩa chung

[3] TCVN 6910-2:2001 (ISO 5725-2:1994), Độ chính xác (độ đúng và độ chụm) của phương pháp đo và kết quả đo – Phần 2: Phương pháp cơ bản xác định độ lặp lại và độ tái lập của phương pháp đo tiêu chuẩn

[4] SCHULTE E, Determination of edible dat refining by HPLC of 3,5-steradiene, Fat Sci, Techol., 96, 1994,  pp. 124-128

[5] LINBURG. and COX R.H. Stigmasta-3,5,22-triene and di-stigamasteryl ete. Can. J. Chem., 35, 1957, pp. 1237-1238

1) Ví dụ, số 7734 hoặc 15101 từ E.Merck, 64271, Đức.

2) Ví dụ, số C6012 từ Sigma chemie GmbH, Grunwalder weg 30, 82041 Deisenhofen, Đức. Thông tin này đưa ra tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn và không ấn định phải sử dụng sản phẩm này

...

...

...

4) Ví dụ, Supersphere 100, RP 18, Số 1.16858 từ E.Merck, 64271 Darmstadt, Đức. Thông tin này đưa ra tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn và không ấn định phải sử dụng sản phẩm này.

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 10713-2:2015 (ISO 15788-2:2003) về Dầu mỡ động vật và thực vật - Xác định các stigmastadiene trong dầu thực vật - Phần 2: Phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC)